低稀释级的平均菌落数×稀释倍数
当比值≤2时,以两稀释级的均值报告,当比值>2时,以低稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告;如同时有3个稀释级的平均菌落数均在30~300之间时,以后2个稀释级计算级间比值报告;如各稀释级的平均菌落数均不在30~300之间,以最接近30或300的稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告;如各稀释级平均菌落数均在300(100)以上,按最高稀释级菌落数乘以稀释倍数报告;如各稀释级平均菌落数均小于30时,一般按最低稀释级的菌落数乘以稀释倍数报告。如当1:10(或1:100 )稀释级平均菌落数等于或大于原液(或1:10稀释级)时,应以培养基稀释法测定,按测定结果报告菌数。
(2) 培养基稀释法
取供试液(原液或1:10供试液)3份,每份各1ml,分别注入5个平皿内(每皿各0.2ml)。每1个平皿倾注营养琼脂培养基约15ml,混匀,凝固后,倒置培养,计数。每1ml注入的5个平板点计的菌落数之和,即为每1ml的菌落数,共得3组数据。以3份供试液菌落数的平均值乘以稀释倍数报告。
如各稀释级平板均无菌落生长,或仅最低稀释级平均菌落数小于1时,则报告菌数为小于10个。
2 、控制菌检查
除另有规定外,取供试液10ml(相当供试品1g、1ml 、10cm<2>),直接或处理后接种,经增菌分离培养后,进行革兰氏染色、生化试验与血清凝集试验项检查。
(1) 大肠杆菌(Escherichia coli)
取胆盐乳糖培养基3份,每份各100ml,2份分别加入规定量的供试液,其中1份加入对照菌液作阳性对照,第3份加入与供试液等量的稀释剂作空白对照。培养18~24小时(必要可延至48小时)。空白对照应无菌生长。其余2份培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂平板或麦康凯琼脂平板,培养18~24小时。当阳性对照的平板呈阳性菌落时,供试品的平板无菌落生长,或有菌落但不同于表1所列的特征,可判为未检出大肠杆菌。
如生长的菌落与表1所列特征相符或疑似者,应挑选2~3个菌落分别接种于营养琼脂培养基斜面,培养18小时,作以下检查:
革兰氏染色
取上述斜面培养物,涂片,固定。以结晶紫染液染色1分钟,水洗,革兰氏碘液媒染1分钟,水洗,滤纸吸干余水。以乙醇脱色20~30秒钟,水洗。滴加沙黄染液复染1分钟,待干后镜检。
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