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微生物限度检查法

  来源:中国药典2000年版二部附录          日期:2006-06-10

  乳糖发酵试验

  取上述斜面培养物,接种于乳糖发酵管,培养24~48小时,观察产酸(培养基变色),产气(杜氏管内有气泡)。

  靛基质试验

  取上述斜面培养物,接种于蛋白胨水培养基中,培养48±2小时,沿管壁加入对靛基质试液0.3~0.5ml,液面呈玫瑰红色为阳性,呈试剂本色为阴性。

  甲基红试验

  取上述斜面培养物,接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基中,培养48±2小时,于每1ml培养液中加入甲基红指示剂1滴,立即观察,呈鲜红色或桔红色为阳性,呈黄色为阴性。

  乙酰甲基甲醇生成试验(V-P 试验)

  取上述斜面培养物,接种于磷酸盐葡萄糖胨水培养基,培养48±2小时,于每2ml培养液中加入α-萘酚乙醇液1ml,混匀,再加40%氢氧化钾溶液0.4ml,充分振摇,出现红色为阳性。加试剂4小时内,如出现红色亦应判为阳性,无红色反应为阴性。

  枸橼酸盐利用试验

  取上述斜面培养物,接种于枸橼酸盐培养基的斜面上,培养48±2小时,培养基斜面有菌苔生长,培养基由绿色变为蓝色时为阳性,培养基颜色无改变时为阴性。

  当空白对照试验呈阴性,供试品检查为革兰氏阴性无芽孢杆菌;乳糖发酵产酸产气或产酸不产气;IMViC 试验为阳性、阳性、阴性、阴性或阴性、阳性、阴性、阴性,判为检出大肠杆菌。对可疑反应的菌株,应重新分离培养后,再作生化试验证实。

  (2) 沙门氏菌(Salmonella species)

  取营养肉汤培养基3份,每份各100ml,2份分别加入规定量的供试液,其中1份加入对照菌液作阳性对照,第3份加入与供试液等量的稀释剂作空白对照。培养18~24小时,空白对照应无菌生长。取其余2份培养液各1ml,分别接种于四硫磺酸钠亮绿培养基10ml中,培养18~24小时。分别划线接种于胆盐硫乳琼脂(或沙门氏、志贺氏菌属琼脂)培养基和麦康凯琼脂(或曙红亚甲蓝琼脂)培养基的平板上,培养18~24小时或延至40~48小时。当阳性对照的平板呈现阳性菌落时,供试品的平板无菌落生长,或有菌落但不同于表2所列特征时,可判为未检出沙门氏菌。

  如供试品平板生长的菌落特征有与表2所列菌落形态特征相符或疑似者,均应挑选2~3个菌落分别接种于三糖铁琼脂培养斜面上,阳性对照同时接种,培养18~24小时后,阳性对照的斜面应为红色,底层为黄色,硫化氢阳性,而供试品疑似菌斜面未见红色、底层未见黄色,可判为未检出沙门氏菌。否则,应继续做革兰氏染色、生化试验、动力检查与血清凝集试验。

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