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微生物限度检查法

  来源:中国药典2000年版二部附录          日期:2006-06-10

  当革兰氏阴性杆菌,氧化酶试验阳性,绿脓菌素试验为阴性,其硝酸盐还原产气试验、42℃生长试验及明胶液化试验均为阳性时,应判为检查绿脓杆菌。

  (4) 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)

  取亚碲酸钠肉汤(或营养肉汤)培养基3份,每份各100ml,2份分别加入规定量的供试液,其中1份加入对照菌液作为阳性对照,第3份加入与供试液等量的稀释剂作为空白对照。均培养18~24小时(必要时可延至48小时)。空白对照应无菌生长。取其余2份培养液划线接种于卵黄高盐琼脂培养基平板上或甘露醇高盐琼脂培养基平板上,培养24~72小时。当阳性对照的平板呈现阳性菌落时,供试品的平板如无菌落生长,或有菌落但不同于表4所列特征,可判为未检出金黄色葡萄球菌。

       表4 金黄色葡萄球菌菌落形态特征─────┬─────────────────
  培养基 │   菌  落  形  态
 ─────┼─────────────────卵黄高盐 │金黄色、圆形凸起,边缘整齐,外围有琼脂   │卵磷脂分解的乳浊圈,菌落直径1~2mm─────┼─────────────────甘露醇高盐│金黄色,圆形凸起,边缘整齐,外围有琼脂
         │黄色环,菌落直径约0.7~1mm
 ─────┴─────────────────


  如有菌落生长并与表4所列特征相符或疑似时,应挑选2~3个菌落,分别接种于营养琼脂培养基斜面上,培养18~24小时,取其培养物革兰氏染色,并作血浆凝固酶试验。

  血浆凝固酶试验

  取灭菌小试管3支,各加入血浆①-无菌水(1:1)0.5ml,1支加入被检菌株的营养肉汤培养液(或浓菌悬液)0.5ml,其余2支作对照管;1支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液或菌悬液0.5ml作阳性对照;另1支加入营养肉汤或0.9%氯化钠溶0.5ml作空白对照。将3管同时培养。3小时后开始检查,以后适当时间逐次观察直至24小时。空白对照管的血浆流动自如,阳性对照管血浆凝固,试验管血浆凝固者为阳性;阳性对照管和空白对照管任何一管不符合要求时,应另制备血浆,重新试验。

  当空白对照和阳性对照符合要求,供试品的菌株为革兰氏阳性球菌、血浆凝固酶试验阳性,判定为检出金黄色葡萄球菌。

  结果判断

  细菌菌落数、霉菌(酵母菌)菌落数、控制菌三项均符合该品种微生物限度项下规定,应判供试品合格;其中任何一项不符合该品种项下规定,应判供试品不合格。

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