1.3.2 抗精子抗体测定 ELISA间接法以1∶20稀释待检精浆100μl加入96孔微量反应板,37℃,1h后,PBS洗涤3min×3次后,加入1∶1000HRP-羊抗人IgG100μl,37℃,40min,PBS洗涤3min×3次后,每孔加入OPD-H 2 O 2 显色剂100μl,15min,用2M H 2 SO 4 终止反应。以DG-3022A型酶联免疫检测仪,492nm波长测定OD值,以阴性对照OD值X±3D确定为阳性。
1.3.3 精子凋亡的检测 将精子标本置冰水中复温,用冷 PBS液稀释精子悬液,取1×10 6 个精子于试管内,加PBS液洗涤,离心,去上清,重复一次,用孵育缓冲液1ml重悬浮,取100μl放入试管中,加入FITC-Annenix V10μl和PI0.3μg染色,室温下避光静置15min后加400μl孵育缓冲液,用FCM检测,阴性对照组孵育缓冲液中不加钙离子。
1.3.4 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件包进行t检验、q检验及相关分析。
2 结果
生育组与不育组ASA阳性检出率、PAS的比较,见表1。
表1 生育组与不育组ASA阳性检出率、PAS的比较
统计学分析表明:不育组与生育组间抗精子抗体阳性检出率、精了凋亡率差异存在显著性(P<0.01),且抗精子抗体阳性率与精子凋亡率呈正相关。
3 讨论
参考文献
1 Oosterhuis GJK,Mulder AB,Kalsbeek-Batenburg E,et al.Measuring apoptosis in human spermatozoa:a biological assay for semen quality.Fertil Steril,2000,74(2):245-250.
2 Ochsendorf FR.Infections in the male genital tract and reactive oxygen species.Hum Reprod Update,1999,5(5):399-420.
3 姜泊,谭晓华,许岸高.细胞凋亡基础与临床,北京:人民军医出版社,1999,280-292.
4 徐晨,王一飞.
沙眼衣原体与不育
不孕.男性学杂志,1994,8(3):180-182.
5 Dousset B,Hussenet F.Cytolines in the human semen.A new approach to male fertility.Presse Med,1997,26(1):24-29.
6 Baccetti B,Collodel G,Piombni P,et al.Apoptosis in human ejaculated sperms cells.J Submicrosc Cytol Pathol,1996,28(4):587-596.
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