1 材料与方法
1.1 标本来源 收集1997年10月~2003年10月辽化医院及中国医科大学第一临床学院大肠息肉癌变病例的切除标本92例,其中男53例,女39例;年龄31~83岁,平均年龄53.7岁,肿瘤大小≥2cm者44例,<2cm者48例。所有标本均伴有不同程度的异型增生,实验中分两类:重度(Ⅲ级)和轻度异型增生(Ⅱ级或Ⅰ级)。另取10例正常大肠粘膜作对照组。
1.2 实验方法 所有标本均经中性甲醛固定,石蜡包埋后4μm连续切片,分别进行HE染色和免疫组织化学染色标记bcl-2和VEGF表达情况。抗体及即用型免疫组化试剂盒均购自福州迈新生物技术开发公司。已知阳性片作阳性对照,PBS替代一抗作阴性对照。
1.3 结果判定 bcl-2和VEGF均以胞浆、胞膜棕黄色为阳性,且阳性细胞数超过10%。
1.4 统计学方法 采用χ 2 检验,以P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 bcl-2蛋白表达 10例正常大肠粘膜均未见阳性表达,腺瘤癌变区与腺瘤轻重度异型增生区表达情况见表1, 大肠腺瘤重度异型增生区及癌变区bcl-2蛋白表达较轻度异型增生区明显增高(P<0.05),差异有显著性,重度异型增生区及癌变区之间差异无显著性(P>0.05)。表1 92例大肠腺瘤癌变组织bcl-2蛋白表达
2.2 VEGF蛋白表达 10例正常大肠粘膜有1例阳性表达,腺瘤癌变区与腺瘤轻重度异型增生区表达情况见表2,大肠腺瘤轻、重度异型增生区及癌变区VEGF蛋白表达较正常大肠粘膜明显增高,差异有显著性(P<0.05),大肠腺瘤轻、重度异型增生区及癌变区之间VEGF蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。 表2 VEGF在正常大肠粘膜和腺瘤及癌变组织的表达n 阳性 阴性 阳性率(略)
3 讨论
bcl-2是抗凋亡基因,不仅抑制细胞凋亡,而且还延长细胞周期 [3] 。本实验结果显示,bcl-2异常表达在大肠腺瘤重度异型增生区及癌变区明显增加,使已发生癌变的及有明显癌变倾向的细胞寿命延长、堆积,从而形成癌性肿块。同时,两者之间差异无显著性,这一现象说明,重度异型增生不仅在形态上与癌变组织非常相似,而且在细胞增殖过程中分子水平已呈现与癌细胞相似的特征。通过内镜技术切除大肠腺瘤,并检测bcl-2蛋白可能作为早期诊断大肠腺瘤癌变的重要参考指标之一。
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