材料与方法
药物、试剂与仪器 巴曲酶为日本东菱工业株式会社产品，其余试剂均为进口或国产分析纯。HITACHI R22A冷冻高速离心机，HARRIS超低温冰箱。
动物与分组 60只沙土鼠，体重50～80g，由徐州医学院实验动物中心提供。随机分为6组：假手术组(1组，6只)，缺血对照组(2组，6只)，常温组(3组，12只)，低温组(32℃，4组，12只)，巴曲酶组(5组，12只)，巴曲酶复合低温组(6组，12只)，除缺血对照组外，其余各组又分为两亚组，再灌注20分钟、60分钟组，每组6只动物。
实验步骤 动物模型制备：沙土鼠腹腔注射戊巴比妥钠30mg/kg麻醉。剪开颈部皮肤，分离双侧颈总动脉，动脉夹夹闭双侧颈总动脉建立全脑缺血模型。夹闭10分钟，然后松开动脉夹使其再灌流。所有用药组动物于动脉夹夹闭5分钟给予腹腔注射巴曲酶(8NU/kg)。用药前巴曲酶用生理盐水稀释一倍。假手术组及其他非用药组给予等容生理盐水。
脑温控制及测定 采用热敏电阻探头，连续监测鼓膜温度［3］。对需要降温的动物使用冰袋全身降温至(32±0.5)℃。正常体温动物置于空气浴箱保温。
脑组织ATP酶活性的测定 动物断头处死，冰面上取脑及海马，置于(0～4)℃0.32mol/L蔗糖缓冲液中冲洗，按文献方法匀浆。Lowery法测定蛋白含量，－75℃保存待测酶活力。应用钼蓝分光光度法测定ATP酶活性。测定Na＋-K＋-ATP酶活性时，脑匀浆与反应液体积比为1∶2，总体积200μl；测定Ca2＋-ATP酶活性时，脑匀浆与反应液体积比为1∶10，总体积400μl；37℃下酶反应20分钟，用5%十二烷基硫酸钠(SDS)40μl终止反应后，3 000r.min－1离心10分钟，取上清液定磷［5］。酶活力单位以每小时(h)分解每毫克组织蛋白(mg.prot)产生的无机磷(pi)的含量(μmol)来表示，单位μmol·pi·mg·prot－1.h－1。
统计学处理 所有数据用均值±标准差(
±s)表示，组间比较采用方差分析，以P＜0.05认为有统计学意义。
上一页 1 [2] 3 4 5 6 下一页
