异丙酚和硫喷妥钠对心肌内游离Ca2＋浓度的影响

　　二、主要试剂和器材　1640培养液(Cibco　BRL，批号：73N2762)和二甲基亚砜(DMSO)均购自美国Sigma化学公司，胰蛋白酶(1∶250，批号：961016)购自上海伯奥生物科技公司，Fura-2/AM由中国科学院上海生理研究所提供，其它为市售分析纯试剂。异丙酚为英国ZENZC公司产品(批号：NN027)，硫喷妥钠为上海新亚药业公司生产(批号：9504204)，氯化钾(XKB-001-0802115Ⅱ，上海试剂二厂)，UMSP30型分光光度计(德国，ZEISS公司)，倒置荧光显微镜(Leica，德国)，CO₂培养箱(B5060　EK/CO₂，Heraeus，美国)，超净工作台(苏州仪器厂)，

　　三、方法

　　1.心肌细胞分离培养^［1］

　　取出生2～3天乳鼠心脏，置于平衡液中，剪取心室部分，用平衡液淋洗3次，剪成1mm×1mm×1mm大小碎块，置于0.15%胰蛋白酶液15ml中消化10分钟，移取上清液至盛有100ml的1640培养液的烧瓶中，再加入胰蛋白酶消化液，重复6～7次。培养液离心(1　000转/分)10分钟，弃上清液，加入1640培养液40ml，移至150ml培养瓶中，于37℃5%CO₂培养箱中贴壁分离分化90分钟，培养液细胞计数，校正至1×10⁶cells/ml，接种于6孔板，每孔置一玻片，使细胞直接接种到玻片上。隔天换培养液，培养7～9天后的细胞用于实验，

　　2.实验分组

　　(1)对照组：不加任何药物；(2)实验组A：Fura-2/AM负载后，按表1加入实验用药孵育10分钟进行Ca^2＋测定；(3)实验组B：加入实验用药孵育10分钟后，加KCl　40mmol/L，1分钟后进行Ca^2＋测定。

表1　异丙酚和硫喷妥钠浓度(mmol·L^－1)