8.0
16.0
注:Ⅰ=产生外科麻醉时的血药浓度;Ⅱ=两倍血药浓度;Ⅲ=四倍血药浓度
3.Fura-2/AM负载与荧光测定[2]
用吸管吸掉培养液,贴在玻片上的细胞用HEPES缓冲液(NaCl 1,KCl 5.4,CaCl2,1.2,MgCl2 1.2,HEPES10和葡萄糖5mmol/L)浸洗2次,然后在含有Fura-2/AM5μmol/L的HEPES缓冲液中孵育30分钟,孵育温度为37℃。孵育后,吸掉Fura-2/AM液,玻片再用HEPES液洗2次后,玻片置于荧光显微镜下的玻璃小槽中,采用德国UMSP30型分光光度计进行Ca2+测定,发射波长为500nm,激发光为汞灯,以波长340nm和380nm的紫外光激发获得荧光图象,细胞影像经计算机图象处理系统处理后,以R340/380的代表细胞内Ca2+荧光强度[3]。该荧光强度与Ca2+浓度成正比。采用同样方法研究KCl、异丙酚和硫喷妥钠对细胞内Ca2+浓度的影响,不同的是加药后需在37℃继续培养10分钟再进行测定,激动剂KCl加入1分钟即行测定。
4.统计学方法
所有数据均采用
±s表示,统计分析采用方差分析和t检验,P<0.05为有统计学意义。
结 果
一、异丙酚和硫喷妥钠对静息心肌细胞内游离Ca2+浓度的影响
浓度Ⅰ、Ⅱ的异丙酚和硫喷妥钠对静息心肌细胞内游离Ca2+浓度无明影响,浓度Ⅲ分别使静息细胞内Ca2+降低20.19%和27.49%(图1)。
图1 硫喷妥钠和异丙酚对静息心肌细胞内游离钙浓度的影响
Ⅰ:外科麻醉药血药浓度;Ⅱ:两倍血药浓度;Ⅲ:四倍血药浓度
团体t检验,*P<0.05