1 材料和方法
1.1 动物 BALB/C,NIH/q同品系小鼠,雌性,7~10周龄,普通级。购自第一军医大学实验动物中心。
1.2 NIH/q鼠供体脾细胞的制备 NIH/q小鼠在无菌条件下取出脾脏,剪碎后经不锈钢网过滤,以NH4Cl溶液处理去除红细胞,混于Hanks液中,离心洗涤,调整细胞浓度至2×1010/L。
1.3 门静脉注射 BALB/C小鼠用0.7%戊巴比妥钠按0.1 ml/10g体重腹腔注射麻醉,腹壁用碘酒酒精消毒,切开腹壁约1 cm长,向左侧翻开小肠,暴露肠系膜上静脉,用5号针头穿刺肠系膜上静脉,注入供体脾细胞0.5 ml,迅速拔出针头,用盐水纱球压迫穿刺点1~2 min。缝合切口。
1.4 实验分组 实验组,1010NIH/q鼠脾细胞0.5ml行BALB/C鼠门静脉接种,隔一周后用同等数量的NIH/q鼠脾细胞行BALB/C鼠背部皮下接种两次,两次接种的间隔时间为一周。对照组,同等数量的NIH/q鼠脾细胞行BALB/C鼠腔静脉接种,隔一周后背部皮下接种二次。空白组,仅背部皮下接种二次。
1.5 迟发性超敏反应(DTH)测定 第二次皮下接种后一周用1010NIH/q脾细胞25μl注射于BALB/C鼠后脚掌,24h后测量脚掌厚度的增值。对侧后脚掌注射同系BALB/C鼠脾细胞以作对照。
1.6 混合淋巴细胞培养测定单向增生反应(MLR)按文献[3]方法进行。
1.7 统计学处理 采用t检验,P<0.05为有统计学意义。
2 结果