异种器官移植是缓解可供移植的人类器官日益短缺矛盾的有效手段，但仍需克服许多障碍。异种移植物接通血流后面对的是受者的整个免疫系统，不能排除细胞免疫的作用，为此，我们利用已经建立的异种（猪→人）肾移植间接体内模型［1］，用流式细胞术检测了人血T细胞流经猪肾前后的变化。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验组 猪肾25只，取自5～6月龄猪(购自上海郊县)。取肾修肾、灌洗同文献［1］。肾重53.7±6.4g，热缺血时间7.1±3.3min；冷缺血时间21.8±2.4h；温缺血时间30.6±8.3min。
1.1.2 对照组 人肾12只，A型3只，B型5只，O型4只。取肾修肾、灌洗同文献［1］。肾重122.7±8.8g。热缺血时间6.7±1.7min；温缺血时间60.8±8.6min；冷缺血时间37.7±7.2h。
1.1.3 人血液 取自健康成人静脉，取血前二周内未服用药物，每单位血液200ml，肝素抗凝（50U／ml）。取出后立即施行灌注，单次灌注200ml，非循环。血液取出至灌注开始时间为9.7±6.1min。
1.1.4 试剂 样本处理液：（A：红细胞溶解剂；B：白细胞稳定剂；C：细胞膜固定剂)；抗CD3：UCHT1 IgG1（小鼠）异硫氰酸荧光素（FITC）标记；抗CD16：3G8 IgG1(小鼠)藻红蛋白（PE）标记。以上试剂购自法国IMMUNOTECH公司。HCA离体肾保存液(上海中心血站)。
1.1.5 仪器 电热恒温水温箱（HHW21 Cr600，北京长安科学仪器厂）；医用滚柱泵（MGS-02，上海医疗器械研究所）；中空纤维氧合器（3381 Medtronic，Inc，USA）；输血器（上海市中心血站）；流式细胞仪（EPICS XL，Coulter，USA）；样本处理机（Q-PREP，Coulter，USA）。
1.2 方法
1.2.1 灌注方法 同文献［1］
1.2.2 血液样品制备及标记 人全血经复温至37℃，氧饱和后由肾动脉灌入，在灌注前及灌注后1，3，5，7，10，15，30min时，由肾静脉各取血液2ml待检。用微量取样器取样本100μl放入12×75mm试管中。在装有样本的12×75mm试管中加入抗CD3单抗及抗CD16单抗各20μl直接标记。室温下静置15min。经样本处理机加红细胞溶解液600μl，充分振荡，使红细胞溶解；加白细胞稳定液250μl，细胞膜固定液50μl，准备上机分析。
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