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抗-Thy1.1单克隆抗体诱发大鼠系膜增殖性肾炎模型

  来源:120online      日期:2007-05-04
肾脏病与透析肾移植杂志1999年第2期第8卷论著摘要作者:达展云 钱桐荪单位:南通医学院附属医院肾内科(南通,226001)关键词:抗-Thy1.1单克隆抗体;系膜增殖性肾炎;发病机制...

  系膜增殖性肾炎(MsPGN)是人类原发性肾小球疾病的最常见病理类型。晚期可发展为肾功能衰竭,严重威胁了人类的健康。然而关于MsPGN的发病机制尚不完全清楚,为了进一步开展有关MsPGN发病机制及治疗方面的实验研究,我们用抗-Thy1.1单克隆抗体成功地诱发了大鼠系膜增殖性肾炎模型。

  1 材料和方法

  1.1 材料 雄性Wistar大鼠(180~220g)购自中科院上海实验动物中心,抗-Thy1.1单克隆抗体由日本Niigata大学医学部肾脏病研究中心惠赠,PCNA(C10)单克隆抗体及S-P(标记链霉菌亲合物蛋白-生物素)购自福州迈新生物技术开发公司。

  1.2 动物分组及模型的制备 40只Wistar大鼠随机分为两组,每组20只。纯化的BALB/C小鼠IgG(0.5mg/200g.周-1)与完全福氏佐剂混和,在大鼠背、颈、四足掌皮下多点注射预免疫。一周后,模型组:从大鼠尾静脉注射抗-Thy1.1单克隆抗体,剂量为0.5mg/(200g.周);再过一周后,再注射抗-Thy1.1单克隆抗体一次,方法、剂量同前,以作加强免疫。对照组:从尾静脉注射正常兔血清1ml/(200g.周),方法同前。

  1.3 观察指标 所有动物于实验前、第一次注射抗-Thy1.1单抗后第一、二、三、四周末进代谢笼,收集24h尿,作尿蛋白测定(采用磺硫酸比浊法)、尿红细胞检查,于实验前及第四周末采血作肾功能测定。于第一、二、三、四周末分批处死动物,作肾组织学检查,包括光镜及肾组织中增殖细胞核抗原(PCNA)检测。

  1.4 免疫组化染色 将石蜡包埋的肾组织切成4μm切片,按S-P试剂盒说明书进行染色。高倍镜下细胞核内褐色颗粒状着色为PCNA阳性细胞。高倍镜下计数每例肾小球、肾小管间质(以每100个有核细胞为单位)中的PCNA阳性细胞。

  2 结  果

  2.1 24h尿蛋白测定 实验前每组尿蛋白均小于10mg/24h,组间差异不显著。在第一、二、三、四周末,模型组尿蛋白明显高于对照组,两组差异显著(P<0.01),见表1

表1 24h尿蛋白定量(±s mg/24h)

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