1 材料和方法
1.1 材料 雄性Wistar大鼠(180~220g)购自中科院上海实验动物中心,抗-Thy1.1单克隆抗体由日本Niigata大学医学部肾脏病研究中心惠赠,PCNA(C10)单克隆抗体及S-P(标记链霉菌亲合物蛋白-生物素)购自福州迈新生物技术开发公司。
1.2 动物分组及模型的制备 40只Wistar大鼠随机分为两组,每组20只。纯化的BALB/C小鼠IgG(0.5mg/200g.周-1)与完全福氏佐剂混和,在大鼠背、颈、四足掌皮下多点注射预免疫。一周后,模型组:从大鼠尾静脉注射抗-Thy1.1单克隆抗体,剂量为0.5mg/(200g.周);再过一周后,再注射抗-Thy1.1单克隆抗体一次,方法、剂量同前,以作加强免疫。对照组:从尾静脉注射正常兔血清1ml/(200g.周),方法同前。
1.3 观察指标 所有动物于实验前、第一次注射抗-Thy1.1单抗后第一、二、三、四周末进代谢笼,收集24h尿,作尿蛋白测定(采用磺硫酸比浊法)、尿红细胞检查,于实验前及第四周末采血作肾功能测定。于第一、二、三、四周末分批处死动物,作肾组织学检查,包括光镜及肾组织中增殖细胞核抗原(PCNA)检测。
1.4 免疫组化染色 将石蜡包埋的肾组织切成4μm切片,按S-P试剂盒说明书进行染色。高倍镜下细胞核内褐色颗粒状着色为PCNA阳性细胞。高倍镜下计数每例肾小球、肾小管间质(以每100个有核细胞为单位)中的PCNA阳性细胞。
2 结 果
2.1 24h尿蛋白测定 实验前每组尿蛋白均小于10mg/24h,组间差异不显著。在第一、二、三、四周末,模型组尿蛋白明显高于对照组,两组差异显著(P<0.01),见表1