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异种、异位肾移植超急性排斥反应模型的初步探讨

  来源:120online      日期:2007-05-04
肾脏病与透析肾移植杂志1999年第1期第8卷实验室方法作者:王 熹 赵 明 邱 实 闵志廉 朱有华单位:第二军医大学长征医院肾移植中心 上海,200003关键词:异种肾移植;超急性排斥;动物模型...

  异种器官移植是可望缓解可供移植的人类脏器日益短缺矛盾的有效途径,超急性排斥反应(HAR)是阻止其成功的关键[1]。为研究其发生机制和有效抑制手段,我们建立了将豚鼠肾脏移植至大白鼠颈部的异种、异位肾移植HAR模型,现报告如下。

  1 材料和方法

  1.1 材料 豚鼠,6只,重250g,性别不限(第二军医大学实验动物中心);SD大鼠,30只,重250 g,雄性(上海计划生育研究所);手术显微镜(GX-SS,22-3;上海医用光学仪器厂);HCA离体肾脏保存液(上海市中心血站);肝素(上海生化试剂三厂);戊巴比妥钠(第二军医大学朝晖制药厂)。

  1.2 方法

  1.2.1 供肾切取 供鼠以戊巴比妥钠(50mg/kg体重)腹腔麻醉,仰卧固定,取腹部正中切口,切开皮肤、腹直肌和腹膜,用自制自动拉钩将腹壁拉向两侧,暴露腹腔内脏器;将肠管推向两侧,充分暴露双侧肾脏及所属区域动脉和静脉。

  1.2.2 供肾血管游离 使用棉签和显微镊钝性分离双侧肾动脉、静脉及其分支,游离和其连接的腹主动脉及下腔静脉,除去血管外膜外脂肪和结缔组织,0号丝线结扎分支血管,保留双侧肾动脉、肾静脉及输尿管;于右肾静脉上方以0号丝线围绕下腔静脉、于左肾动脉下方以0号丝线围绕腹主动脉,暂不结扎。

  1.2.3 原位灌注 结扎右肾静脉上方的下腔静脉,结扎左肾动脉上方的腹主动脉。轻轻提起左肾动脉下方腹主动脉围绕线,于提起处远端用眼科剪剪一向心端斜切口(腹主动脉勿切断),向心方向插入自制灌注管,同一水平切开下腔静脉,用0~4℃ hCA肾保存液(内有少许肝素)原位灌注双侧肾脏,至双肾体表面灰白,肾静脉流出的灌注液清亮为止。整块切取双肾及输尿管,注意适当保留输尿管周围结缔组织。

  1.2.4 供肾修整 0~4℃下修整双肾,左肾静脉于腹腔静脉根部结扎离断;于右肾静脉上方结扎下腔静脉、下方保留一段下腔静脉备吻合用。双肾动脉各留一片Carrels瓣后与腹主动脉分离。

  1.2.6 观测方法 显微镜下由输尿管口观察移植肾的泌尿情况。以停止泌尿1 h以上为发生排斥反应。此时切除移植肾行病理检查。

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