1.5 免疫组织化学分析 选取珊瑚组、HA组及空白对照组术后2，4，8，12周标本，石蜡切片经二甲苯脱蜡,采用ABC法进行免疫组化染色,PBS液代替一抗作阴性对照。抗TGFβ单克隆抗体由上海细胞生物研究所生产，ABC免疫试剂盒为Vector Lab公司产品。
免疫组化染色切片在Quantimet 570图像分析仪(Leica公司)上作灰度定量分析,将定量分析分2个区域测定,即靠近原骨床区和远离原骨床区(以下简称近、远区)。每一标本测2张切片,每张切片近、远区各选4个视野测定,取均值,所得数据用第四军医大学统计教研室研制的SPLM统计软件进行t检验和方差分析。
2 结 果
2.1 光镜观察 植入后2～4周，珊瑚组及HA组，可见大量纤维组织长入陶瓷颗粒间及孔隙内,原骨床边缘新骨形成,不断向缺损中心区长入。在近原骨床区成骨细胞数量多，骨化活跃，骨细胞中有大量阳性颗粒，间质中可以看到弥散的阳性颗粒，远区阳性反应稍有减弱，新生骨细胞内呈阳性反应，近骨膜侧的成纤维细胞呈阳性反应。珊瑚组植入材料间增生的纤维结缔组织呈阳性或弱阳性反应；HA组与珊瑚组类似,材料间的纤维组织阳性范围较为局限(图1A,B)；空白对照组新骨形成不明显，成骨细胞数量少，成骨细胞可见阳性反应，近原骨床区间质中可见弥散的阳性颗粒，向缺损中心区减弱(图1C)。
图1 术后2周 各组TGFβ表达免疫组化染色(ABC×132)
Fig 1 Expression of TGFβ by immunohistochemistry staining
2 weeks postoperatio n (ABC×132)
A：Coral group；B: HA group；C: Control group
植入后8周，珊瑚组和HA组新骨生成量均显著增加，成骨细胞呈阳性着色，植入陶瓷周围也可见到阳性着色，珊瑚被逐渐吸收，HA占位无明显变化；空白对照组近原骨床侧有少量新骨长入缺损区，缺损区大部分仍为纤维结缔组织充填，阳性反应主要局限于近骨床端新骨及邻近间质中。
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