李慧 邵莹 张澎 安秀梅 郝希山
摘 要 目的：旨在用敏感的RT－PCR方法扩增目的基因，用于检测干细胞富集血中残存的肿瘤细胞。方法：应用RT－PCR方法检测样品MUC1、K19基因的表达情况。结果：乳腺癌细胞系MCF－7中MUC1、K19表达阳性，而在淋巴细胞中则未见有表达。进一步用淋巴细胞稀释乳腺癌细胞来检测该方法的灵敏度。MUC1、K19检测残存肿瘤细胞的灵敏度均达到1/105。在此基础上，完成了15例乳腺癌患者干细胞富集血检测工作。结论：RT－PCR是检测残存肿瘤细胞检测中行之有效的方法。
关键词：乳腺癌 自体外周血干细胞移植 微小残存病 RT－PCR
随着乳腺癌治疗方法的进展和外周血干细胞移植治疗肿瘤新技术的问世，乳腺癌的综合治疗有了很大发展[1,2]。但干细胞富集血中残存的肿瘤细胞的存在是对肿瘤患者进行自体干细胞移植必需解决的问题。我们将分子生物学检测方法引入到血中残存瘤细胞的检测中，监控微小转移灶，提高移植的安全性，延长生存期。
检测富集血中的残存肿瘤细胞，有两方面的问题亟待解决。一是要有肿瘤特异性的生物标记；二是灵敏度高的实验方法，能从大量的血中检测出极微量的肿瘤细胞。近几年，分子生物学的发展及其应用，为这方面的研究开辟了一条新的途径。我们通过对RT－PCR方法的特异性及灵敏度加以分析，在此基础上进行了干细胞移植富集血残存肿瘤细胞的检测工作。
1 材料与方法
1.1 样品
乳腺癌细胞系MCF－7、由CS－3000循环血分离所得淋巴细胞、用淋巴细胞稀释乳腺癌细胞使其浓度由1/102至1/106、15例行APBSCT（自体外周血干细胞移植）的乳腺癌患者的外周血干细胞。
1.2 RNA的提取
采用Trizol法制备总RNA，用Trizol（Gibco产品）裂解细胞后，加入氯仿并离心使之分为水相和有机相两层。转移RNA所在的水相，并用异丙醇沉淀RNA，经80％乙醇洗涤后用水（RNase free）溶解。制备的RNA样品用核酸定量分析仪检测OD260、OD260/OD280的值，并计算RNA产量。
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