高压恒流脉冲刺激器为第二军医大学数理教研室研制;UV754型分光光度计为上海第三分析仪器厂产品;RM2035冰冻切片机为瑞典Leica公司产品;EU861 3-V12深低温冰箱为美国Puffer Hubbard公司产品;Universal 16R低温高速离心机为德国Hettich公司产品;TGL-16G台式高速离心机为上海安亭科学仪器厂产品;NOS活性测试盒 购自北京东亚免疫技术研究所;兔源大鼠NOSⅠ,NOSⅡ,NOSⅢ多抗购自Sjgma公司,ABC试剂盒购自华美生物工程公司;pH7.2磷酸钾缓冲液20%(W/V)为本室自己配制;雄性SD大 鼠购自上海计生所西普尔-必凯公司。
1.2 方法
雄性SD大鼠96只,体质量180~200g,自然光照,食用标准丸状饲料,饲养与实验隔音隔间 。高压恒流脉冲刺激器作为模型制作的核心部分,它能够同时输出三路光信号和二路电击信号,可发出规则光和非规则光两种光。所谓规则是指光信号与电击的次序和间隔是不 变的,这里是光闪2 s后进行电击。非规则是光与电击的次序与间隔是不同的,即次序不定 ,间隔随机。电击大鼠足爪。氖泡亮时强度为35 Lux,电刺激参数为波宽2 ms,频率250 Hz ,串长1 s,电流3.0 mA。实验分3期顺序进行[1]。
1.2.1 适应期1-7 d 此期内每天将每只鼠分别在实验盒内放置25 mi n,动物在第4天可自行钻入实验盒,主要是消除实验盒所造成的应激因素。
1.2.2 心理性应激形成期8-14 d 动物在第8天随机分3组,每组32 只(每组又分4个亚组,每亚组为8只):对照(C)组仅给不规则光;规则光(R)组给光后再给电 刺激,光与电间隔恒定;不规则光(Ⅰ)组给光和电刺激的间隔随机。每天给予相同实验,每 次30 min。
1.2.3 心理性应激记忆期 第15天起各组动物均无电刺激,余同第2期。
1.3 测定指标
2 结果
2.1 NOS活性变化情况
表1 在不同刺激条件下NOS活性