第一军医大学附属珠江医院儿科（510282） 江凌晓综述 封志纯审校
摘要 神经细胞的原代培养技术经过几十年发展已日趋成熟。在培养过程中神经细胞的存活、生长、发育、形态功能及衰老死亡受某些物质的影响，这与生理或病理条件下神经细胞的变化相似，因此可以通过对培养条件的控制来模拟神经的多种生理、病理变化，以期弄清多种疾病的发病机制，并为临床预防及治疗提供论依据。
关键词 神经生物学 细胞，培养的
神经细胞原代培养是一种应用广泛的实验室技术。它具有容易控制，对处理因素干扰小，实验结果稳定，观察指标易于选择和敏感的优点。因此，现已成为研究神经细胞形态和功能、生长和发育、损伤和再生及缺血等生理、病理变化及其影响因素的重要方法之一。
神经细胞的原代培养
一、取材 最早用于原代培养的神经细胞取自6－8天的鸡胚，以后大多取自15－18天胎龄的大鼠或小鼠[1]，但实验动物的胎龄往往很难准确掌握，故近来多取自当天出生的大鼠。新生大鼠的神经细胞虽已近分裂后期，开始分化，但仍属幼年，对各种外界因素的适应性和可塑性仍比较强，故此种细胞的质量、数量和存活时间均能达到一般实验的要求。新生48小时的大鼠神经细胞由于分化的较完全，故其适应性和可塑性进一步降低，对照实验中可见细胞数量显著减少，培养16天后很难用于实验。
二、培养 取在冰箱（－12℃）冷冻10分钟左右的新生大鼠（出生24小时之内），在无菌条件下断头取脑置于盛有PBS液（Ph 7.2）的平皿中，在解剖显微镜下剥去脑膜，取大脑皮层（或其它区域如海马、隔区、纹状体、下丘脑等）并剪碎，在37℃下用0.125%胰蛋白酶液消化30分钟，中间振摇1－2次，消化后用吸管反复吹打（动作轻缓，避免产生气泡），制备细胞悬液。以1×106个／ml细胞密度接种于涂有多聚赖氨酸的培养皿内，每皿2ml置于37℃，5％CO2，饱和湿度的培养箱中进行培养（DMEM培养液含10％胎牛血清，100μg/ml谷氨酰胺，10mg/ml葡萄糖，100IU/ml青霉素，100μg/ml链霉素）。24小时后换培养液。培养第三天加入阿糖胞苷10－5mol/L，以抑制非神经细胞的继续增长。
[1] 2 3 下一页
