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检测体外中性粒细胞自发性激活的方法学研究

  来源:120online      日期:2007-05-09
生物医学工程学杂志1999年第2期第16卷论著作者:吴立志 陈槐卿单位:华西医科大学生物医学工程研究室,成都 610041关键词:中性粒细胞;自发性激活;伪足;硝基蓝四唑...

  各标本均常规作全血白细胞计数,分类计数,NBT试验,上清孵育液第1 h和第8 h白细胞计数,台盼蓝排除法计数活性白细胞的百分率。

   2.2 检测方法

  伪足法:抗凝血装入硅化试管中,以45°斜放于37 ℃恒温水浴中静置45 min,取上清液(此上清液中富含白细胞、血小板,还有少量散在的红细胞)与0.9%生理盐水1∶2混匀,装入另一试管中,加盖,于恒温水浴中孵育,轻微振荡,以防白细胞聚集和粘附。自采血时起每隔1 h用巴氏吸管吸取孵育液100 μl加至显微观察板的凹槽中,加盖玻片后在倒置相差显微镜×100油镜下观察100个中性粒细胞,计数伸出伪足的中性粒细胞的百分率。4 min内记数完毕。

  在1000倍的放大倍数下可清楚地分辨出各种白细胞。中性粒细胞直径为7.4~8.5 μm,胞浆中含有大量强折光性的颗粒。淋巴细胞直径6.0~7.5 μm,它和单核细胞的胞浆中均不含颗粒。嗜酸性和嗜碱性粒细胞较中性粒细胞略大,胞浆内颗粒亦比中性粒细胞的大,折光性更强。死亡中性粒细胞内的颗粒作快速布朗运动。按Chang等的标准,无变形的球形细胞上伸出的突起,长度超过1 μm者确认为伪足[2]

  NBT法:抗凝血装入硅化试管中,于37 ℃恒温水浴中振荡孵育。采血后每隔1 h取100μl全血,与0.2%NBT生理盐水溶液和0.15M PBS各50 μl装入另一试管中,混匀后加盖,于37 ℃水浴中孵育20 min,再置20 ℃孵育10 min,取细胞层制成血片,Wright's染色后在×100油镜下观察100个中性粒细胞,计数NBT阳性细胞的百分率。标准为:胞浆中含有蓝黑色的细小颗粒(比细胞本身的大)或较粗大的凝块[3]

         

(a)伸出伪足的中性粒细胞          (b)NBT阳性中性粒细胞

  (a)A neutrophil protruding pseudopod     (b)A NBT positive neutorphil

图1 激活的中性粒细胞

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