检测体外中性粒细胞自发性激活的方法学研究

图2　两种方法检测体外自发性激活的中性粒细胞的时相变化

　　Fig 2　Time course of spontaneously activated neutrophils in vitro measured by pseudopod method and NBT test

　　^*pseudopod method vs NBT test　　P＜0.01

　　从表1中和图中可见：(1)各小时检测出的中性粒细胞的激活百分率，伪足法均明显高于NBT法(P＜0.01)；(2)两种方法检测出的中性粒细胞的激活百分率均表现出由低升高再逐渐降低的时相过程，最大激活百分率出现在采血后第3 h；(3)NBT法的时相曲线呈双峰状，两峰分别出现在采血后第3 h和第7 h，第3 h的激活百分率明显高于第7 h(P＜0.01)，第5、6、7 h之间两两比较，差异无显著性(P＞0.20)。

　　4　讨　论

　　4.1　两种检测方法的理论依据

　　中性粒细胞被激活时，膜上的Ca²⁺泵被激活，Ca²⁺外流，细胞内部分区域Ca²⁺浓度发生变化，使肌动蛋白在球状单体和长链状双螺旋多聚体两种形态之间转变，加之肌球蛋白收缩，就形成了伪足，细胞因此得以进行趋化、吞噬、脱颗粒等活动^［4］。同时NADPH氧化酶被激活，催化氧分子得电子被还原成超氧阴离子，超氧阴离子及其衍生物是中性粒细胞的主要杀菌物质，这时活跃的电子传递活动可将NBT还原成蓝黑色的甲月(无无)/(日)(formazan)而沉淀在细胞浆中^［6］。因此可用伪足法和NBT法来检测激活的中性粒细胞，这两种方法简便、直观、实用。

　　4.2　中性粒细胞自发性激活的时相特点

　　采用伪足法和NBT法来检测中性粒细胞的激活，其时相具有以下二个特点：

　　5　结　论

　　本实验研究表明：(1)检测体外中性粒细胞自发性激活，伪足观察法较NBT酶组化法灵敏、可靠，且可实时观察。(2)体外中性粒细胞自发性激活的百分率呈现由低升高，再逐渐降低的时相特征，最大激活百分率出现在采血后第3 h。研究结果为以后进一步深入研究中性粒细胞激活与多种疾病的关系提供了方法学基础。

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