1.2.4 戊二醛交联 经高温处理初步交联的胶原海绵再放入0.25%戊二醛溶液内,置4 ℃冰箱24 h后,用滤过自来水漂洗2 h,然后换成双蒸水置4 ℃冰箱24 h,去除未结合残存的戊二醛。交联后的胶原海绵,可贮存于70%乙醇或异丙醇内,或再进行真空干燥备用。
1.3 聚氨酯-胶原海绵复合膜
外层为聚酯膜,15~50 μm厚,含有5~15 μm的微孔,内层为0.2~0.5 mm厚胶原海绵,孔径为50~300 μm,两膜复合粘接而成。
1.4 涂聚氨酯胶原海绵膜
在胶原海绵一面涂聚氨酯,然后经室温或烘箱干燥而成。
1.5 胶原纱布敷料
方法一,先将医用纱布在0.05 M乙酸溶液中浸湿,平铺在模板上,倒上适量的胶原溶液(约15 ml/600cm2),擀平,置-30 ℃冰箱预冻4h以上,然后按上法冷冻干燥和交联。方法二,先将胶原倒入玻璃膜板上,刮平,覆盖一层经0.05 M乙酸浸湿医用纱布,按上法预冻,冻干和交联。
1.6 理化测试
分析提取牛腱胶原的氨基酸谱(日本,HITACHI835-50 Amino acid analyzer)和紫外吸收光谱(美国,Du-7 Beckman),以及光、电镜观察胶原海绵和各种创伤修复材料的结构。
2 结 果
2.1 吸收光谱及氨基酸分析
胶原在紫外分光光度计上最高吸收峰值为223 nm左右,表明乙酸水解的牛腱胶原的主要成份为氨基酸和DNA。从表1氨基酸谱中可以看到18种氨基酸的含量情况。甘氨酸最高,约占氨基酸总量的25.4%,其次是脯氨酸、谷氨酸、羟脯氨酸和天门冬氨酸。
2.2 冻干胶原海绵
上述方法冻干的胶原都能获得良好的海绵
表1 牛腱胶原蛋白氨基酸谱
Table 1 Amino acid spectrum of collagen protein for bovine tendon
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