用PCR-SSCP方法检测中国人Alport综合征COL4A5基因突变

丁洁　郭顺华　俞礼霞　杨霁云

　　摘要　目的：检测中国人Alport综合征（AS）患者编码Ⅳ型胶原α 5链的COL4A5基因突变。方法：提取18例中国X连锁显性遗传型AS患者基因组DNA，据COL4A5基因中与外显子相邻的内含子序列设计引物，分别作DNA聚合酶链式反应（PCR），扩增了该基因第20～51外显子。以琼脂糖凝胶电泳鉴定产物，作单链构象多态性（SSCP）分析检测PCR产物，对迁移率异常者进行DNA测序。结果：PCR-SSCP分析发现患者8的20、39和46外显子，以及患者90的26外显子的PCR产物单链DNA迁移率异常，亦发现患者8之母存在与其相同的异常迁移带以及正常迁移带。DNA测序证实患者8的COL4A5基因第20外显子1157和1158位缺失CC两个碱基，而第39及46 外显子为同义突变；患者90第26外显子2171位缺失一个C碱基。这两位患者的缺失突变均致移码突变，并使终止密码子提前出现，导致Ⅳ型胶原α 5链显著缩短。结论：首次报道了中国大陆AS患者COL4A5基因的两个小缺失突变，其中一个缺失突变伴有两个同义突变，未发现大片段缺失及重组突变。通过PCR-SSCP分析亦证实一患者之母为COL4A5基因的杂合子。

　　关键词：肾炎　遗传性　突变　胶原　多态现象　单链构象

　　Alport综合征（Alport syndrome,AS）是一种表现为血尿、进行性肾功能损害，常伴感音神经性耳聋及眼部病变的遗传性疾病^［1-3］。主要的遗传方式为X连锁显性遗传（XD）。国外的研究已证明XD型AS存在编码Ⅳ型胶原α 5链的基因——COL4A5的突变，因此导致肾小球基底膜等处的胶原结构不能正常形成^［4-5］ 。尽管有关AS患者的COL4A5基因突变国外已有不少报道^［6-8］，但尚无我国大陆AS患者该基因突变的资料。为此，我们对18例中国AS患者，应用聚合酶链式反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）及DNA测序方法检测COL4A5基因，以确定

表1　PCR方法扩增COL4A5基因第20～51外显子引物序列及反应条件