1 材料和方法
1.1 研究对象 (1)随机收集109名体检者， 男28名，女81名，年龄52～100岁，均为汉族，来自江苏省无锡市。(2) 另从专科门诊中收选ADPKDⅠ家系和27名无血缘关系的该病患者。ADPKDⅠ诊断标准：B超或CT证实有多囊肾、多囊肝，有家族史；家系标准是至少两代人、两个以上患者。 家系1：多囊肾患者2人，健康者1人；家系2，3：均为患者和健康者各2名； 家系4：患者3人，健康者2名。
1.2 DNA样本的获取 取外周血8～10ml， (1)按经典法，分离出血白细胞，酚-氯仿抽提DNA；(2) 按“低渗法”，红细胞直接用5 倍体积的双蒸水破碎，沉淀即白细胞，以后同(1)；(3) 按“包块法”，将上述得到的血白细胞置于1.5%低熔点琼脂糖，分制成数个100μl的小块， 再经蛋白酶K，RNA酶消化得到DNA样本。
1.3 ADPKDⅠ基因3′ 端单拷贝区突变情况的调查 (1) cDNA探针AH4(荷兰Leiden大学人类基因组系提供),位于ADPKDⅠ基因3′端和结节性硬化症(TSC2) 基因3′端单拷贝区中的两个BamHⅠ酶切位点之内(图1),按碱裂解法制备，与经BamHⅠ酶切的ADPKDⅠ患者基因组DNA Southern杂交。(2) PCR方法。扩增 AH4 和JH14探针间约5.72 kb的基因组DNA(图1)，引物序列：AH4F2，5′-GGGLAAG GGAGGATGACAAG-3′；JH14B3，5′-GGGTTTATCAGCAGCAAGCGG-3′；按特异性扩增条件扩增后，产物经12% 聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。
图1 ADPKDⅠ基因3′端突变情况图解 Fig 1 A detailed map of mutation in 3′end of ADPKDⅠ gene 1.4 微卫星 SM7 扩增方法 引物1：5′-ACATATGTAGTCTTCTGCAGG-3′；引物2：5′-ACAAGAGTGAATCTCTGACAG-3′；按特异性扩增条件扩增产物经12%聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。
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