Fig 4 Polymorphisms of SM7 in family 1 on 12% non-denaturing acrylamide gels
3 讨 论
1994年， 欧洲多囊肾协作组报道了克隆到ADPKDⅠ基因［4］，其结构特点是 3′ 末端1/3的基因组区段是单拷贝，5′端2/3是重复区域(图1)，因此寻找突变的工作相当困难。Harris等用1A1H6和CW10两个cDNA探针，对282个无血缘关系的ADPKDⅠ患者进行了基因组DNA Southern杂交，作突变筛查，结果发现2例3′末端单拷贝区的突变，其中1例为5.5kb的缺失(图1)，另1例是个新生(de novo)突变，有2 kb的基因组DNA 缺失。 此外， 他们采用RT-PCR法对另外48例患者cDNA的3′ 末端单拷贝区进行了筛查，又发现1 例拼接突变［4］。Sehneider等［5］用单链构象多态性(SSCP)及DNA测序技术对ADPKDⅠ患者3′末端单拷贝区的8个外显子逐一进行了分析，又发现了3个错义突变。本研究采用ADPKDⅠ3′末端cDNA探针AH4，与16例无血缘关系患者的DNA进行Southern杂交，检查ADPKDⅠ基因3′末端至5′端一侧的BamHⅠ酶切位点间约9kb的间距内， 有无大片段基因组DNA缺失，或增加，或酶切位点改变等。 结果均出现了15kb的正常条带，未发现有明显的缺失突变(图2)；同时合成AH4F2和JH14B3一对引物，采用PCR方法，对AH4和JH14两个探针间约5.72kb的基因组DNA进行了检查(图1)，共筛检27例患者，亦未发现有Harris报道的5.5kb的缺失，均显示仅有390bp的扩增条带，而未发现有220bp条带(图3)。因此认为：我国ADPKDⅠ患者中，ADPKDⅠ基因3′端单拷贝区无常见性大片段基因组DNA 缺失类突变。
虽然从已有的研究资料显示，利用SM7多态性可在70%～80%的ADPKDⅠ家系中作出基因诊断，这极有利于再生殖选择，避免了相当多的患儿继续出生。但仍有约20%～30% 的家系不适用，此时仍需联合应用其他多态性遗传标记合并Southern方法才能对其作出基因诊断。因此，从方便基因诊断的角度来说， 尽快从已克隆的ADPKDⅠ基因中找到具有普遍意义的突变方式，仍是目前当务之急。
王立明，男，1965年6月生，博士，副主任医师
作者单位：王立明 闵志廉 朱有华 齐 隽 长征医院泌尿外科，上海，200003；
