Tabe 2. Results from lysate of infected cells
图1 普氏立克次体在L929细胞内的生长曲线
Fig 1. Growth curve of Rickettsia prowazekii in L929
讨 论
实践中胞内生长微生物的定量测定一直是个问题。我们以胞内生长菌普氏立克次体为模型，建立了用RNA酶保护分析法作为胞内生长微生物的定量测定方法。结果表明，用硫氰酸胍裂解感染细胞，用裂解物直接做RNA酶保护分析有几大优点：①硫氰酸胍在裂解细胞的同时，灭活了RNase,使得RNA样品不受降解，保证了样品的完整性，且样品中的硫氰酸胍并不影响随后的核酸杂交，这使得直接用裂解物做测定成为可能。②直接用裂解物做测定，省去了对胞内寄生物或其结构成分进行分离纯化的过程，避免了纯化过程中难免的样品丢失，提高了测定的准确性。③省去纯化过程使方法简化，缩短了试验时间，通常可在24小时内获得实验结果，较之空斑定量法有大大提前，可与细菌学中的活菌计数相比拟。④本法的高度特异性是建立在RNA酶保护分析法基础上的，只要被检核酸与探针序列互补或仅有一至数个碱基不配对，都可被RNA酶保护分析法区分开，故其特异性高于Southern或Northern杂交。方法将定量测定从微生物个体水平提高到分子数测定水平。
本方法的基本要求是要清楚被测对象的一段特异性核苷酸序列(作为探针)。实际上本方法实用于定量测定一切有已知特异序列的对象(如病毒等)，并不限于本文中测定的立克次体。
曲线的另一特点是上升斜率较细菌生长曲线小，这可能反映出立克次体较细菌增殖速度慢得多的特点。这与普氏立克次体繁殖一代的时间在34℃时约为10小时的事实相符〔10〕。
参考文献
[1]Ormsbee RA,Peacock MG.Rickettsial plaques assay and cloning procedure.Tissue Culture Assoc,1976,2∶475-482.
[2]Xiaoxing C,Shurong Y and Guoquan Y,et al.Red plaque formation of Coxiella burnetii and reduction assay by monoclonal antibodies. Acta,1989,33∶281.
上一页 1 2 3 4 [5] 6 下一页
