significantly while the damage to the ultrastructure was reduced to a great degree.Conclusion FDP can
efficiently protect brain neuron in DHCA.
Key words cytochemistry;neurophysiology;calcium/metab;hypothermia,induced;neurons/ultrastruct;
diphosphonates/ther use;dogs
钙内流及随后的细胞内钙超载，能导致一定类型的细胞死亡，这已被认为是缺血缺氧性细胞损伤的一个基本原因。近年来临床与实验研究表明，在15℃～18℃的深低温下，脑组织可以耐受缺血缺氧的时限为45～60分钟〔1〕，然而停循环时间太短，许多复杂畸形的修复手术又不能顺利完成。本实验采用犬DHCA模型，结合焦锑酸钾组化技术，观察DHCA120分钟后脑神经细胞内Ca2+分布和超微结构改变，并应用图象处理系统对细胞内钙颗粒的数密度、体密度及颗粒大小等参数进行定量分析，试图探索钙内流在超微结构改变中的重要作用，寻求一种DHCA
120分钟下脑保护的有效方法。
材 料 和 方 法
一、DHCA脑损伤动物模型的建立
用闭胸式体外循环（CPB）方法建立犬DHCA模型，动物经血流降温至鼓膜温18℃后，停止全身循环2小时.，期间以冰袋覆盖头部维持脑温，用α方式管理血气。停循环结束后复温至37℃，继续观察8小时后处死动物。
9只成年犬随机分成三组，正常组（n=1）、对照组（n=4）进行单纯18℃DHCA2小时，术中不用药物，脑保护组（n=4）于DHCA结束时经颈静脉向头部注射FDP375 mg/kg（Sigma公司产品）。其中对照组又分为DHCA结束、再灌60分钟和术后8小时三个小组。保护组分为再灌60分钟和术后8小时二个小组。取右侧额顶叶皮质观察。
二、Ca2+电镜组化显示技术〔2,3〕
迅速取样后，将样品放在预冷的蜡板上并在组织表面滴预冷的3%戊二醛-90 mmol/L草酸钾溶液，切小组织后置于上液中进行0～4℃固定2小时，随后用7.5%蔗糖-90 mmol/L草酸钾溶液振荡浸洗，继之以1%锇酸-2%焦锑酸钾做后固定，然后进行酒精梯度脱水，环氧树脂812浸透过液，平板包埋、超薄切片后经醋酸铀与柠檬酸铅电子双重染色，日立H-600透射电镜观察、拍照。
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