4. PCR-SSCP检测： ① DNA抽提：上述标本经 TES缓冲液(pH 7.8)去蜡→2μl蛋白酶K及40 μl 裂解液消化（50℃，24～36 h）。② PCR：取标本4 μl 注入 19.2 μl PCR反应液中（含 Taq酶 0.8 μl），并给予 1滴石蜡油进行外反应(94℃90 s→94℃ 30 s→56℃ 30 s→72℃ 60 s，循环30次)；将标本稀释25倍后进行内反应(同外反应程序，循环37次)；2%琼脂糖凝胶电泳(0.5 h，电压110 V)，观察泳动带，收集产物。③SSCP：25 μl PCR反应产物加入12μl变性液，经97℃ 10 min→ 冰浴5 min→30% 聚丙烯酰胺凝胶电泳→固定液中固定15 min→洗脱→染色液中染色10 min→洗脱→显色液中显色。④观察摄片：观察PCR-SSCP反应结果，摄取泳动带，比较条带分布情况。空白对照组标本显示两条单链影像，发生Ha-ras基因含第61位密码子突变的标本在两条单链前出现第3条链影像。
结果
1.金地鼠颊囊粘膜上皮重度异常增生及原位癌组织病理切片见图1，2。分别取自OLK模型组涂布DMBA5周和7周标本。
图1粘膜上皮重度异常增生（×100） 图2 粘膜原位癌（×100）
2．Ha-ras突变阳性信号见图3。图中5号标本为阳性对照，取自上海第二医科大学口腔医学院SCC标本，表现为Ha-ras基因突变的第3条链影像。6号标本为阴性对照，取自本实验空白对照组。8号标本取自本实验OLK模型组，显示有Ha-ras基因突变的泳动带。其余各标本均为本实验GP处理组，标本时间点为涂DMBA5～7周。
