放射联合淋巴细胞对腺样囊性癌的抗瘤效应

　　材料与方法

　　1．细胞：

　　（1）靶细胞 ：ACC-M人涎腺腺样囊性癌肺高转移株(上海第二医科大学口腔医学院口腔颌面外科实验室提供)。

　　（2）效应细胞：取自1995年5月至1996年2月上海第二医科大学口腔医学院口腔颌面外科收治的6例口腔癌住院患者，均经病理证实为原发性口腔恶性肿瘤，其中鳞癌4例，基底细胞癌1 例，恶性淋巴上皮病1例。术前均未行放、化疗。

　　2． 效应细胞制备:见参考文献［5］。

　　3.照射条件:⁶⁰钴γ射线，剂量率为(70.9～63.2)cGy/min，室温照射。

　　4.实验设计:实验前用ACC-M 1×10⁸/L细胞接种在50 ml培养瓶中，于含15%小牛血清的RPMI 1640培养液(含青霉素10×10⁵ U/L，链霉素1 mg/L)中,在37 ℃、5%CO₂培养箱内培养约40 h。实验时将处于指数生长期的细胞分成对照组和各处理组。

　　(1)空白对照组(C): 将ACC-M细胞常规消化，调整细胞浓度至1×10⁹/L，接种一定数量细胞于25 ml培养瓶内。

　　(2)单纯放射组(R): 将ACC-M单细胞悬液分别经0.5、2、4、6、8 Gy单次照射后，接种于25 ml培养瓶中。

　　(3)DNL组(D):以效靶比(E∶T)25∶1，将处于抗瘤活性高峰期(培养7～25 d)的DNL和指数生长期ACC-M细胞接种于25 ml培养瓶。

　　(4)放射结合DNL组(R+D):将不同剂量照射过的ACC-M细胞按R组相应放射剂量组同样数量接种于培养瓶后，以E∶T=25∶1加入DNL细胞。

　　以上各组实验每个剂量点设3个瓶，处理后置37℃、5%CO₂培养箱培养14 d，去培养液后Giemsa染色，计数每瓶生长的克隆数，以光镜下≥50个细胞为1个克隆。

　　5．数据分析：每次实验从空白对照组得出集落贴壁率(plating efficiency， PE)，100%。各处理组的细胞存活率 (survival fraction, S)：1-S。 剂量修饰因子(dose modifying factor ，DMF)：

　　剂量效应曲线分别按单击多靶模式和LQ模型用计算机进行曲线拟合。存活率的比较和生存曲线参数的比较均用Wilcoxon配对符号秩和检验。所有数据用SPSS 6.0软件处理。

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