一、材料和方法
1.细胞株:腺样囊性癌Acc-2细胞株和从中筛选出的肺高转移Acc-M细胞株[3],由上海第二医科大学口腔医学院提供。
2.与细胞外基质粘附能力测定:于96孔板每孔中分别加入含纤维粘连蛋白、层粘连蛋白和基底膜胶2 μg的培养液50 μl,干燥后加含8×108/L的细胞悬液100 μl,1 h后弃掉培养基和未粘附的细胞,每孔加MTT(四氮甲唑蓝)40 μg,4 h后去除MTT,加二甲基亚枫200 μl,用酶标仪在570 nm处测定吸光度值。
3.细胞运动能力测定:方法[4]: 将纤维粘连蛋白按10 mg/L稀释,24孔板每孔加300 μl,1 h后加入2.5×108/ L的细胞悬液400 μl,细胞贴壁后用刮子划出条形刮除带,更换培养液后拍照;定时观察细胞运动至即将汇合时用戊二醛固定,并计算出运动距离和速度。
4.勃顿小室法侵袭重组基底膜实验:用纤维粘连蛋白作趋化剂,每个培养小室内加入2×109/ L的细胞悬液100 μl,分别于侵袭4、6、8 h将滤膜固定,HE染色,400倍光镜下计数侵袭细胞数,计算平均值。
二、结果
1.Acc-M细胞株对纤维粘连蛋白、层粘连蛋白和基底膜胶的粘附率分别为79.4%、71.1%和69.8%;Acc-2细胞株分别为61.8%、42%和60.4%,经统计学检验对纤维粘连蛋白粘附能力差异有显著性,对层粘连蛋白有高度显著性。
2.Acc-M细胞株移动能力较Acc-2强,终止实验时Acc-M、Acc-2细胞株运动距离分别为27.2 μm和13.8 μm;运动速度分别为2.26 μm /h和1.15 μm /h。
3.2个细胞株均具有侵袭重组基底膜的能力,实验后4、6、8 h 3次检测,Acc-M细胞株侵袭细胞数分别为39.80±3.42、82.40±5.58和103.20±5.63;Acc-2细胞株分别为26.40±3.20、53.20±3.70和68.00±4.35。经统计学检验差异有高度显著性。
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