Key words：Temporomandibular joint; Calcitonin gene-related peptide; Nerve fibers▲
降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide,CGRP)是初级感觉神经的兴奋性递质，由37个氨基酸组成，其生物活性高，有效浓度低［1］。近年的研究表明，CGRP在膝、踝等滑膜关节的发病机制中有十分重要的作用［2］。而Alstergren等［3］检测颞下颌关节(temporomandibular joint, TMJ)内紊乱病和类风湿关节炎患者滑液中CGRP的浓度，结果显著高于正常TMJ及炎性膝关节滑液中的水平。因此认为CGRP与TMJ疾病的关系可能更密切。本项实验观察鼠TMJ中CGRP阳性纤维的分布，为研究神经因素在TMJ疾病中的作用提供形态学依据。
材料和方法
1.标本制备：取雄性SD大鼠8只（重180～220 g，鼠龄4周），经其腹膜下注射1%戊巴比妥钠1ml，打开胸腔，经心插管至升主动脉，灌注固定，取双侧TMJ置于15% EDTA(乙二胺四乙酸)中脱钙4周，在20%蔗糖液中脱水24 h。每只大鼠的两侧关节均用恒冷切片机分别行矢状及冠状切片，片厚45 μm。
2.染色：将经0.3 % Triton-X-100洗涤后的切片用含0.3% H2O2的甲醛和10%的羊血清依次封闭内源性过氧化物酶和生物素，然后分为实验组和对照组。实验组加1:7 000稀释的一抗，即兔抗鼠CGRP血清(Watpa，新西兰),置于4℃湿盒中48 h, 再经0.01 mol/L磷酸缓冲盐水(PBS)清洗后，加生物素化羊抗兔血清，置于4℃湿盒中12 h；清洗后加ABC复合物，置室温下3 h。以0.01 mol/L PBS洗3遍，双蒸水洗2遍备用。将50 mg DAB溶于50 ml蒸馏水中，将2.5 g硫酸镍胺溶于50 ml 0.2 mol/L醋酸缓冲液中(pH值为6.2),两者过滤后混合,再加入200mg葡萄糖及40mg氯化胺,搅匀后加0.8mg葡萄糖氧化酶(Sigma，美国)。将切片置入上液中反应20min,终止反应。
3.对照实验：①空白对照：用0.01 mol/L PBS取代一抗;②血清对照：用健康兔血清取代一抗；③吸收对照:用合成的鼠CGRP纯品(Watpa,新西兰) 1.0 μmol/L加入稀释的一抗，置于4℃湿盒中48 h，离心，取其上清液代替一抗。其余步骤均同实验组。
