材料与方法
1.材料：UMR-106成骨肉瘤细胞株。含10% NBS 的极限必需培养基(α-MEM)。TGF-β1和OPN 2种互补DNA(cDNA)探针由施松涛博士（美国南加州大学）惠赠，片段长度在0.5～1.2 kb之间。地高辛DNA标记与检测试剂盒系德国Boehringer Mannheim公司产品。德国产IBIS－II型多功能图像分析仪。
2.方法：
（1） 培养细胞牵张施力装置的设计与研制：作者设计制作的培养细胞牵张施力装置由3部分组成：①Petriperm弹力膜培养皿；② 机械支持与力量传递系统；③动力系统和变频调节器［频率范围为(10～24)周/min］(图1)。工作原理：生长于培养皿内表面的细胞在培养皿底面与倒置凸透镜保持接触的情况下，依弹力膜的弹性形变而被牵拉。牵张作用的幅度与频率通过调整调节丝和预置频率选择而确定。本装置中培养皿可以方便地卸装。施力装置在二氧化碳恒温培养箱中，使细胞的生存环境接近生理状态。
A 立柱 B 基台 C固定盘
D Petriperm弹力培养皿 E 倒置的透镜
F 电机 G 顶簧 H 横杆
I 竖杆 J 调节丝 K 曲柄
1 Petriperm弹力膜牵张施力装置结构示意图
为了研究不同幅值和频率条件下机械牵张作用对UMR-106细胞基因表达的影响，本项研究设计了3组不同幅度和频率组合对细胞进行牵张刺激。3组条件分别以［Petriperm弹力膜培养皿中心点垂直位移量（表面面积变化率）＋作用频率］表示：A组：5.0 mm (21 %) +24周/min；B组：3.4 mm(14%)+16周/min；C组：1.7 mm(7%)+10周/min。实验中，每个实验组为6个培养皿同时受力。另设等量对照。分别在第12 h、24 h和48 h 3个时间点固定处理细胞，通过原位杂交观察UMR-106细胞中OPN mRNA和TGF-β1 mRNA的表达情况。每个实验观察点取2个培养皿。
(4)结果观察与分析： 杂交后48 h内，采用德国产IBIS－II型多功能图像分析仪分别测量杂交区对应于培养皿半径的外1/3、中1/2和内1/3处杂交信号的吸光度(A)值并照相记录；每个区域随机选取3个部位各测量3次，取平均值。采用SPSS 6.0统计分析软件对所得吸光度值进行统计分析，进行组间配对t检验。
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