资料和方法
一、标本来源
1.实验小鼠肾脏:Ⅱ级昆明小鼠9只,鼠尾静脉注射白念珠菌2×105cfu/鼠,7d后处死,无菌条件下取肾脏,经3.33mol/L(10%)福尔马林固定,用于组织病理学研究。
2.临床标本:共28份,均属回顾性研究。标本来源:肺9例,脑组织1例,胃粘膜3例,心瓣膜2例,肾动脉1例,鼻咽部5例,声带1例,皮肤5例,尿管型1例。根据组织中真菌形态分为可疑念珠菌感染7例,可疑隐球菌感染9例和可疑曲霉感染12例。
二、组织病理学检查
1.HE染色和PAS染色:与常规组织病理学方法相同。
2.免疫组化染色:采用过氧化物酶标记链霉亲和素法(LSAB法),切片常规脱蜡入水;0.3%过氧化氢,室温,30min;10%羊血清,室温,30min;一抗,37℃,30min;二抗,37℃,30min;三抗,37℃,20min;DAB显色;常规脱水、透明、封片。
3.一抗种类:兔抗白念珠菌多克隆抗体(B0794),Dako公司赠送,对白念珠菌特异;兔抗新生隐球菌多克隆抗体(B3002),购自Dako公司,对新生隐球菌特异;鼠抗曲霉单克隆抗体(M3564),购自Dako公司,对烟曲霉和黑曲霉特异。
结果
一、念珠菌感染
(一)动物实验部分:
1.小鼠播散性白念珠菌感染1周时,肾脏呈轻微病变、淋巴细胞浸润或化脓性改变。HE染色孢子和菌丝淡染,略嗜碱,不易发现,结构不清晰。PAS染色见白念珠菌多位于集合管和肾小盏中。个别见于肾小管、输尿管内。真菌细胞多聚集存在,均表现为菌丝和孢子共存,易见芽管。孢子和菌丝全部染成紫红色,中央略淡。芽生孢子呈椭圆形,壁薄,直径一般3~6μm,可见发芽。菌丝多呈假菌丝,较细,较直,分支少。
2.小鼠肾脏抗白念珠菌抗体免疫组化染色:①7例肾脏组织兔抗白念珠菌多克隆抗体免疫组化染色为阳性(7/9),孢子和菌丝染成棕褐色,与PAS染色结果一致。②取2只感染小鼠肾脏做连续切片,相邻切片分别做PAS染色和免疫组化染色,各64张切片,两种染色阳性和阴性结果完全一致,阳性49张,阴性15张。阳性率为49/64,经统计学处理(χ2检验,P>0.5),差异无显著性。
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