图2甄氏外瓶霉聚类分析树状图
讨论
甄氏外瓶霉是一组较为复杂的群体,目前认为其包括3个变种：E.jeanselme ivar.jeanselmei；E.jeanselme ivar.heteromorpha；E.jeanselme ivar.lecanii－corni。外抗原实验显示有3种血清型；DNA杂交将其分为6型[5]，其中1、2、3型为血清Ⅰ型，4型为血清Ⅱ型，5、6型与血清Ⅲ型相一致；线粒体DNARFLP分析则将45株甄氏外瓶霉分为15型，但作者未标明与血清型的关系[6]。从以上实验可见，甄氏外瓶霉并非单一的种,而是种的复合体,分型较为复杂。
核糖体DNAPCR分型早已用于真菌种及种以上水平的分类，其转录间隔区（ITS）在核糖体DNA中进化较快,可以在同一属间甚至群体间发生变化。资料表明,ITSⅡ区在种内变异性较低（＜3％），种间变异性较高（约22％）[7,8]。引物ITS3位于5.8SrDNA5′端，ITS4位于25SrDNA5′端，用该对引物得到的扩增片段包括5.8SrDNA大部分序列及完整的ITSⅡ区，约为330bp左右。
本实验中，15株菌可分为6型，多数菌株（13株）具有较近的亲缘关系（SM＞0.7），型内相似程度较高，各变种间差异较大,SM值在0.5左右,与种间SM值相似。此结果还与18SrDNA分型和ITS1－ITS4分析的结果一致[9,10]。本研究支持3个变种应分属于不同种的观点。我们还发现同属变种E.jeanselme ivar.heteromorpha的BMU00457与BMU00010酶切带型差异较大（SM=0.51），前者与模式株BMU00001具有较高的亲缘关系。对于该变种的划分，还有商榷的余地；BMU00195分离自我国1例神经系统暗色丝孢霉病患者的病损组织，加拿大和美国学者将其鉴定为E.jeanselme ivar.lecanii－corni。1997年，ATCC将其收录为E.jeanselme ivar.lecanii－corni，并编入其菌种目录（编号为ATCC201307）。本实验中，此菌与同一变种的BMU00480（ATCC12734）差异极大，4种酶切图谱有3种不同，与其它菌株相似程度亦较低。在包括其它菌种的所有受试菌株中，只有该ITSⅡ序列能被HinFⅠ识别，提示该菌有可能为新变种或者为新种，但尚有待于进一步深入研究其多方面的特性。
志谢日本千叶大学真菌医学研究中心为本实验提供了部分受试菌株；中国科学院微生物研究所黄河研究员、刘小勇硕士在实验方法上给予了帮助
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