CTTCCAACCCGAGCG－3′(2596～2617bp)。
(四)新生隐球菌基因组DNA的提取：提取CCCC10148及CCCC10297基因组DNA均参考文献[8]并改进。操作过程：实验菌株在沙堡琼脂培养基上30℃培养48h，然后转种到YEPD(酵母浸膏占1％，蛋白胨占2％，葡萄糖占2％)培养液100mL中，30℃摇床16h，菌体离心4000r/min5min，用无菌水洗2次。用5mLSCE(0.1mol/L柠檬酸三钠，1mol/L山梨醇，10mmol/LEDTA，pH5.8)重浮，1mLSCE内含1mgNovozyme234。离心取沉淀，充分混悬于含1％SDS的Tris－EDTA，65℃，30min，同时加入蛋白酶K50μg/mL，加2/5体积预冷的5mol/L乙酸钾，冰浴30min，12000r/min离心15min，上清液用酚氯仿抽提1次，上清液用2倍体积无水乙醇沉淀，4℃2h，12000r/min离心10min，弃上清液，收集DNA，15.2mol/L(70％)乙醇洗2次，真空干燥，加80μLTE，再加入4/5μLRNA酶，65℃20min，移入Eppendorf管中，再用饱和酚氯仿抽提1次，2倍体积无水乙醇沉淀4℃过夜，
12000r/min离心10min，15.2mol/L乙醇洗涤，真空抽干，溶于200μLTE，－20℃保存。
(五)PCR扩增：TaqDNA聚合酶是由德国BoehringerMannbeim生产的高保真PwoDNApolymerase，PCR扩增仪为美国生产PTC－100ProgrammableThermalController。PCR标准反应体系在0.5mL进口硅化Eppendorf管中进行，反应体积为50μL，加入10×缓冲液（TaqDNA配套缓冲液，MgCl2浓度为25mmol/L），引物均为25pmol,4×dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dTTP，Promega公司)各为250μmol/L，模板（基因组DNA）100ng加灭菌三蒸水补足体积至50μL，96℃变性5min，加入TaqDNA聚合酶2.5U(0.5μL)，循环条件为94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，循环35次，再以72℃延伸10min使新链延伸完全。
(六)PCR产物鉴定：PCR产物以2％琼脂糖凝胶电泳，溴乙锭染色，Marker(Takara公司生产的DNAMarkerDL－2000)对照，照相，又进行了3.5％聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进一步鉴定。
二、结果
新生隐球菌白化突变株酚氧化酶结构基因DNA编码出现异常情况。
