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小檗碱抗皮肤癣菌作用的研究

  来源:120online      日期:2007-05-07
中华皮肤科杂志2000年第5期第33卷短篇论著作者:徐薇 赵俊英 曹仁烈...

  我们自1997年6月至1999年2月采用试管内液基稀释法测定了小檗碱对部分致病性真菌的最小抑菌浓度(MIC),通过电镜观察药物作用后真菌的超微结构改变。并对小檗碱溶液治疗浅部真菌病的作用进行了实验动物观察。

  一、材料与方法

  (一)小檗碱对部分致病性真菌最小抑菌浓度的测定:

  1.药物与菌种:小檗碱由北京制药六厂提供。皮肤癣菌56株中红色毛癣菌36株,须癣毛癣菌6株,絮状表皮癣菌8株,羊毛状小孢子菌6株;念珠菌属10株。

  2.抑菌实验:将小檗碱用2.5%二甲基亚砜(DMSO)溶解后,倍比稀释成以下不同浓度的药液培养基,每毫升含药量依次为400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56μg,另设二组对照管,依次为含2.5%DMSO管和空白对照管。待测真菌用0.9%灭菌盐水制成菌液,最终含菌量控制在1×105~5×105cfu/mL。将制备好的各株菌的菌悬液加入药液培养基后,置温箱培养6d后观察结果。

  3.结果判定:按0、+、、和5个等级记录,0级表示真菌未生长,培养液清晰;+级表示真菌略有生长,培养液微混;级表示真菌约有50%的生长;级表示真菌生长后的浊度比无药对照管稍有减少;级表示浊度与对照管相同,真菌完全生长。终点判定为80%的真菌被抑制(0~+)时的第1个药物浓度即定为其MIC值。1周后完全按上述方法和程序重复1次。

  (二)电镜观察:在含有200μg/mL的小檗碱沙堡斜面上接种米粒大小菌块(须————————

  癣毛癣菌),25℃孵育7d,采取小块菌落,常规制备扫描电镜和透射电镜标本观察。

  (三)动物试验:

  1.受试动物Wistar大鼠20只,为国家标准动物,鼠龄3个月左右,体重400g左右,均为雄性。

  2.受试药物:治疗组,小檗碱由北京制药六厂提供,以DMSO溶解后,配成质量浓度为200μg/mL的溶液。对照组,5%DMSO。空白对照组,0.9%灭菌生理盐水,以观察真菌感染的自然消长。

  3.方法:将大鼠适应性饲喂1周后,以受试大鼠背面的左侧、中侧和右侧为感染区,常规感染须癣毛癣菌,并经真菌镜检、真菌培养和组织病理证实后,在上述三处分别外用小檗碱溶液、5%DMSO溶液和0.9%灭菌生理盐水。每感染处涂药2次/d,连续8周,每3d进行一次真菌镜检和皮损观察。

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