一、材料与方法
(一)小檗碱对部分致病性真菌最小抑菌浓度的测定:
1.药物与菌种:小檗碱由北京制药六厂提供。皮肤癣菌56株中红色毛癣菌36株,须癣毛癣菌6株,絮状表皮癣菌8株,羊毛状小孢子菌6株;念珠菌属10株。
2.抑菌实验:将小檗碱用2.5%二甲基亚砜(DMSO)溶解后,倍比稀释成以下不同浓度的药液培养基,每毫升含药量依次为400、200、100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.56μg,另设二组对照管,依次为含2.5%DMSO管和空白对照管。待测真菌用0.9%灭菌盐水制成菌液,最终含菌量控制在1×105~5×105cfu/mL。将制备好的各株菌的菌悬液加入药液培养基后,置温箱培养6d后观察结果。
3.结果判定:按0、+、、和5个等级记录,0级表示真菌未生长,培养液清晰;+级表示真菌略有生长,培养液微混;级表示真菌约有50%的生长;级表示真菌生长后的浊度比无药对照管稍有减少;级表示浊度与对照管相同,真菌完全生长。终点判定为80%的真菌被抑制(0~+)时的第1个药物浓度即定为其MIC值。1周后完全按上述方法和程序重复1次。
(二)电镜观察:在含有200μg/mL的小檗碱沙堡斜面上接种米粒大小菌块(须————————
癣毛癣菌),25℃孵育7d,采取小块菌落,常规制备扫描电镜和透射电镜标本观察。
(三)动物试验:
1.受试动物Wistar大鼠20只,为国家标准动物,鼠龄3个月左右,体重400g左右,均为雄性。
2.受试药物:治疗组,小檗碱由北京制药六厂提供,以DMSO溶解后,配成质量浓度为200μg/mL的溶液。对照组,5%DMSO。空白对照组,0.9%灭菌生理盐水,以观察真菌感染的自然消长。
3.方法:将大鼠适应性饲喂1周后,以受试大鼠背面的左侧、中侧和右侧为感染区,常规感染须癣毛癣菌,并经真菌镜检、真菌培养和组织病理证实后,在上述三处分别外用小檗碱溶液、5%DMSO溶液和0.9%灭菌生理盐水。每感染处涂药2次/d,连续8周,每3d进行一次真菌镜检和皮损观察。
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