4.疗效判断:痊愈为皮损完全消退,真菌学检查阴性;显效为皮损消退>60%,真菌学检查阴性;好转为皮损消退20%~60%,真菌学检查阴性或阳性;无效为皮损消退<20%,真菌学检查阳性;复发为临床痊愈后,在原处出现皮损,真菌学检查阳性。
二、结果
(一)小檗碱对部分致病性真菌最小抑菌浓度的测定:溶媒对照与生长对照均见菌落生长,可见2.5%DMSO无抑制真菌作用。小檗碱对红色毛癣菌、须癣毛癣菌和絮状表皮癣菌的MIC值均为200
μg/mL,对羊毛状小孢子菌的MIC值为100μg/mL,对念珠菌属无明显抑菌作用。在含有200μg/mL小檗碱的沙堡斜面上,接种须癣毛癣菌,并与含2%DMSO的沙堡固基做对比,可见含小檗碱的沙堡斜面上的菌落明显<2%DMSO组,而2%DMSO组与0.9%生理盐水组菌落大小相近。取小块菌落观察,发现经小檗碱处理后,透射电镜下细胞壁不完整,边缘模糊,细胞膜皱缩,与胞膜分离,细胞浆空泡增大,细胞破坏明显,可见大量电子薄区,细胞核结构破坏。扫描电镜下菌丝皱缩、断裂、变形、紊乱,孢子粗糙,形状不等。
(二)动物实验:背部接种须癣毛癣菌的大鼠至第6天感染形成,经真菌镜检和真菌培养证实,并做病理经PAS染色,在角质层中可见到菌丝和孢子。确定真菌感染形成后,开始外用药治疗。治疗组涂药后7d痊愈4只,10d痊愈12只,14d痊愈2只,20d痊愈2只,治疗20d左右,局部感染处开始生长毛发,至40d左右基本恢复,PAS染色未见菌丝和孢子。对照组涂药后35d痊愈2只,42d痊愈4只,45d痊愈12只,49d痊愈2只,毛发恢复时间长达50d。空白对照组,即真菌的自然消长在感染后60d。
三、讨论
小檗碱是从植物黄连、黄柏等药用植物中提取出来的有效成分,我们测定了小檗碱对部分致病性皮肤癣菌的最小抑菌浓度,并用扫描和透射电镜观察到,小檗碱作用后细胞壁、细胞膜和细胞浆均发生明显变形、破坏。根据此结果,我们又做了动物试验,本次动物试验采用自身对照试验,结果发现治疗组痊愈天数平均为10.8d;而对照组痊愈天数平均为43.8d,明显高于治疗组。上述研究表明小檗碱对皮肤癣菌有较强的抑制作用,机理可能为小檗碱影响了真菌细胞膜合成或代谢的某个环节,改变其通透性,使药物进入细胞内,导致细胞溶解、细胞器消失,体外动物试验也表明外涂小檗碱后,临床和真菌学检查均在短时间内消失和转阴。
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