维A酸对细胞周期素D1、周期蛋白依赖性激酶4及P16表达的影响

　 来源：120online    　 日期：2007-05-07

　　银屑病患者皮损表皮细胞增殖周期较正常皮肤明显缩短。在细胞周期中G1期变异最大，细胞周期素D₁（cyclinD₁）、周期蛋白依赖性激酶4（cyclin dependent kinase4，CDK₄）及周期蛋白依赖性激酶抑制物(cyclin dependent kinaseinhabitor,CKI)P16分子是G1期的主要调控者。我们应用维A酸霜外用治疗银屑病皮损，然后分别检测了其皮损用药前后表皮角质形成细胞中CyclinD₁、CDK₄及P16三者的mRNA及其蛋白质表达水平，报道如下。

　　一、材料和方法

　　（一）病例及取材：病例选自门诊及住院确诊的寻常型银屑病患者13例，其中斑块状损害11例，点滴状损害2例。实验前3个月内未使用皮质类固醇、免疫抑制剂、维A酸类及维生素D3类药物，亦未接受其他系统治疗，不伴有肿瘤及其他严重疾患。年龄25～72岁，病程6周至30年。实验开始，13例患者仅外用迪维霜治疗，治疗2～5周后取材。其中2例用药治疗后的皮损基本消退，11例治疗后的皮损面积较治疗前变小，浸润减轻，鳞屑消失，但皮损尚未完全消退。正常人组皮肤取自正常成人包皮环切术8例，正常成人上臂皮肤2例，共计10块。银屑病皮损用环钻取材（全层皮肤），常规3.33mol/L(10％)中性福尔马林固定，石蜡包埋，室温存放。

　　（二）主要试剂及仪器：CDK₄的cDNA质粒由美国冷泉港实验室DavidBeach博士惠赠，CyclinD₁及P16cDNA质粒由北京大学病理系张波教授惠赠。Dig－RNA标记与检测试剂盒及Biotin－21－UTP为德国BoehringerMamnheim产品。RNA聚合酶（SP6、T3和T7）及质粒线性化酶（XhoⅠ,SamⅠ和EcoRⅠ）为美国Promaga产品。CyclinD₁单抗及CDK₄、P16多抗为美国SantaCruz产品。过氧化物酶标记的链霉亲合素蛋白（SP）染色试剂盒为美国Zymed产品。迪维霜（0.025％维A酸）为重庆华邦制药有限公司产品。图像处理分析系统为LEICAQ550/WUSA。

　　二、结果

　　（一）原位杂交CyclinD₁、CDK₄及P16的mRNA定量分析结果：银屑病皮损经维A酸治疗后，其CyclinD₁和CDK₄的mRNA表达水平较未经治疗的银屑病皮损低，较正常人的皮肤高(P＜0.05)；P16的mRNA表达水平较未经治疗的银屑病皮损高，较正常人皮肤低(P＜0.05)。见表1。

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