材料和方法
一、实验材料
1.SephadexG100为Pharmacia产品，BiogelP10为Biorad产品。
2.念珠菌菌株：共4种5株菌，分别为白念珠菌M1012R、NIHA－207、乳酒念珠菌、热带念珠菌、季也蒙念珠菌，其中白念珠菌M1012R、NIHA－207系标准菌株，其余菌株系我科真菌实验室的保存菌株（购自北京大学医学真菌研究中心）。
3.常用试剂配方：沙堡液体培养基：1％蛋白胨、4％葡萄糖、0.05％放线菌酮、0.025％氯霉素。底层琼脂：1％琼脂糖、1％沙堡固体培养基、10mmol/L磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4)。2×营养琼脂：1％琼脂糖、2％蛋白胨、8％葡萄糖。
二、实验方法
1.人中性粒细胞防御素的制备：参照吴琦等[5]的方法进行。
2.防御素抗念珠菌实验：菌株及防御素样品：取对数生长期念珠菌，PBS洗涤，用血球计数板计数后调整菌数至2×107个/mL。人中性粒细胞防御素用0.01％乙酸稀释成62.5μg/mL、125μg/mL、250μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL等浓度。
琼脂糖弥散法抗菌实验：在10mL底层琼脂中加入对数生长期念珠菌（念珠菌终浓度为105个/mL），混匀后倾入方形塑料平皿（Falcon产品），在底层琼脂上打孔（直径3mm），每孔加入5μL不同浓度防御素，阴性对照孔加入0.01％乙酸。将平皿倒置放入孵箱内，3h后在底层琼脂上覆盖一层2×营养琼脂，倒置，37℃过夜孵育。每一菌株同时作3个平皿。
美蓝染色法测定人中性粒细胞防御素抗菌实验：取对数生长期念珠菌50μL，加入等体积不同浓度的人中性粒细胞防御素，对照管则加0.01mol/LPBS，于37℃恒温水浴3h。以0.02％美蓝染色3min后，镜检菌体呈深蓝色的为死菌，不着色的为活菌。计数300个菌中的死菌及活菌数，算出念珠菌的死亡率。抗菌实验重复3次。
防御素作用后的电镜观察：实验管每管加入人中性粒细胞防御素（250μg/mL）和念珠菌（107个/mL）各0.1mL，对照管加入0.01mol/LPBS和念珠菌（107个/mL）各0.1mL，37℃恒温水浴3h后用2.5％戊二醛固定，常规方法处理标本后在扫描电镜（AMRAY1000－B型）及透射电镜（JEM－100SX型）下观察并照相。
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