结果
一、人中性粒细胞防御素
采用SephadexG100及BiogelP10凝胶过滤层析可获得纯化的人中性粒细胞防御素。
二、琼脂糖弥散法抗菌实验结果
琼脂糖弥散法显示人中性粒细胞防御素对白念珠菌M1012R、白念珠菌NIHA-207、乳酒念珠菌、热带念珠菌、季也蒙念珠菌均有抗菌活性。在实验孔中每孔加入0.312μg(62.5μg/mL×5μL)人中性粒细胞防御素时即对白念珠菌M1012R、白念珠菌NIHA-207、乳酒念珠菌、热带念珠菌、季也蒙念珠菌显示显著抗菌活性,随着每孔加入人中性粒细胞防御素的增多,抗菌环直径增大。5株念珠菌对人中性粒细胞防御素的敏感性依次为季也蒙念珠菌、乳酒念珠菌、白念珠菌M1012R、白念珠菌NIHA-207、热带念珠菌。
三、美蓝染色法测定人中性粒细胞防御素抗菌实验结果
选择对人中性粒细胞防御素敏感性高的白念珠菌M1012R、乳酒念珠菌、季也蒙念珠菌用美蓝染色法作体外抗菌实验,菌浓度为107个/mL。各菌株实验结果见图1~3。抗菌实验重复3次。每次计数300个菌中死菌数,求出3次实验死菌数的均数和标准差,结果见表1。
表1美蓝染色法测定人中性粒细胞防御素杀菌活性
1.扫描电镜观察结果:由图4可见,人中性粒细胞防御素(250μg/mL)作用后的念珠菌与对照组比较,念珠菌菌体表面可见明显的凹陷及穿孔。白念珠菌M1012R和乳酒念珠菌菌体表面可见大小不一的凹陷,季也蒙念珠菌菌体表面可见穿孔。
2.透射电镜观察结果:由图5可见,人中性粒细胞防御素(250μg/mL)作用后的念珠菌与对照组比较,念珠菌菌体断面结构不清晰,细胞内成分固缩成电子密度较高的团块,其间有大片空白,胞膜不连续,胞膜与胞壁分离。
讨论

图1美蓝染色法测定人中性粒细胞防御素抗白念珠菌M1012R实验结果(0.02%美蓝染色,×400),a:对照组白念珠菌M1012R,菌体不着色为活菌b:经人中性粒细胞防御素作用3h后的白念珠菌M1012R,菌体呈深蓝色为死菌
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