人参皂甙Rg1对体外培养鼠黑素瘤细胞系的化疗增敏作用

　　图1100μmol/L人参皂甙Rg1处理细胞72h，部分培养细胞变圆、树状突消失、脱壁以及不规则球形体产生(×200)

图2100μmol/L人参皂甙Rg1处理72h，培养细胞经AO/EB双重荧光(×200)

图3透射电镜观察100μmol/L人参皂甙Rg1处理72h，培养细胞的超微结构(×5000)

　　(二)B16F10细胞培养与光学显微镜观察：取指数生长期的B16F10细胞，初始接种5000个/cm²左右。细胞接种24h后，用添加药物的新鲜培养基换液1次。继续孵育72h。加药处理后3、12、24、48、72h在倒置显微镜下观察细胞形态学变化并摄像记录。收获细胞分为2份用于酪氨酸酶活性和黑素含量测定。

　　(三)试剂配制与实验分组：人参总甙、人参皂甙Rg1、MeCCNU贮液用DMSO新鲜配制，保存在－20℃冰箱2周内使用。临用时用新鲜培养基调至终浓度。实验设定人参总甙终浓度分别为1、10、50μg/mL；人参皂甙Rg1终浓度分别为10、100、500μmol/L。参照文献^[1,2]，另选黑素瘤细胞株敏感的MeCCNU50μmol/L作阳性对照。实验分组为：人参总甙、人参皂甙Rg1、MeCCNU单独处理组;“人参总甙＋MeCCNU”和“人参皂甙Rg1＋MeCCNU”联合处理组;“人参总甙→MeCCNU”和“人参皂甙Rg1→MeCCNU”序贯处理组。序贯处理程序为前一种药物处理3h后，换液除去，随后用第2种药物再处理3h。空白对照组仅加入溶媒DMSO。

　　(四)酪氨酸酶活性与黑素含量测定及MTT法测定细胞存活率：见我们以前报道的方法^[3]。

　　(六)透射电镜观察:收集约10⁷细胞,离心弃上清液,常规超薄切片制作，电子显微镜观察早期凋亡细胞超微结构变化。

　　(七)流式细胞术(FCM)细胞周期分析与凋亡细胞百分率测定：收集约10⁶细胞，离心弃上清液，常规制备流式细胞仪上样标本，进行细胞周期分析和凋亡细胞检测。

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