三、菌种分离、培养
用刮屑法或胶带法在患者典型皮损或正常人面部取材，接种于Leeming和Notman培养基平板中，32℃培养7～14d。将经50％派克墨水染色后确定为马拉色菌的第一代培养物在同种培养基平板上画线培养分离单菌落，取单菌落增菌保存。
四、菌种鉴定
待鉴定菌株与标准菌株同时实验。鉴定前48h活化菌种。鉴定方法如下：
1.将菌种接种于沙堡培养基上32℃培养7～14d，能在沙堡培养基上生长者为厚皮马拉色菌。
2.过氧化氢酶试验：用无菌棉签挑一块菌落置于无菌载玻片上，滴加3％过氧化氢溶液，产生气泡为阳性。可鉴定出限制性马拉色菌。
3.吐温试验及PEG－35蓖麻油（CremophorEL）试验：取一环菌种与5mL生理盐水充分混合后，取2mL菌悬液与16mL沙堡培养基（温度降至40～45℃）混合制成含菌平板。用直径3mm打孔器在平板上无菌打孔5个，分别加入100％吐温20、100％吐温40、100％吐温60、100％吐温80及100％PEG－35蓖麻油，32℃培养7～14d。在以上5种脂源周围都能生长的为糠秕马拉色菌；高浓度吐温20和PEG－35蓖麻油周围无生长者为合轴马拉色菌；吐温80周围生长的面积明显小于其他吐温，同时PEG－35蓖麻油周围无生长者为斯洛菲马拉色菌。吐温20、吐温80周围无生长者为钝形、球形和限制性马拉色菌。
4.七叶苷分解试验：取一环菌种接种于七叶苷琼脂培养基上32℃培养2～3d。能使培养基变黑至少1/3的为合轴马拉色菌和钝形马拉色菌，只能使培养基顶端变黑的为糠秕马拉色菌，可疑阳性可为厚皮马拉色菌和糠秕马拉色菌，阴性可为糠秕马拉色菌、斯洛菲马拉色菌、球形马拉色菌和限制性马拉色菌。
5.形态学鉴定：主要用于区分钝形马拉色菌和球形马拉色菌。孢子为球形者鉴定为球形马拉色菌，孢子为筒形者鉴定为钝形马拉色菌。
6.形态学观察：将所得各种马拉色菌在Leeming和Notman培养基平板上画线分离出单菌落，32℃培养10d，观察菌落形态；用无菌接种针挑取单菌落涂片，用50％派克墨水染色后观察孢子形态并照相；用2.5％戊二醛固定，按常规方法处理标本后在扫描电镜（AMRAY1000－B型）和透射电镜（JEM－100SX型）下观察并照相。
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