1.细胞:鼠纤维肉瘤细胞株WEHI－164、IL－6依赖细胞株7TD－1,来自北京大学临床免疫室。
2．细菌:β溶血型链球菌菌株,北京大学微生物教研室提供。
3．β溶血型链球菌的培养、收获及定量:见文献[1]。
4．各组PBMC24h培养上清液的收获及贮存见文献[1]。
5．结晶紫比色法检测PBMC培养上清液中TNF－α改变[2]:生长良好的WEHI－164细胞,用PRMI－1640配成5×105/mL细胞悬液。每孔100μL加入96孔板;分银屑病和对照组加入PHA和链球菌刺激的PBMC培养上清液,每孔100μL;37℃,体积分数5％CO2条件下24h;弃上清液,PBS洗1次;每孔加入0.5％结晶紫200μL,30min;弃结晶紫,用蒸馏水洗6～8次;每孔加入冰醋酸水溶液120μL振荡3min,测波长570nm处A值。TNF－α活性以细胞死亡百分比表示。细胞死亡百分比=[1－(实验组A－空白组A)/(对照组A－空白组A)]×100％,其中对照组为未加PBMC培养上清液者。
6．MTT法检测PBMC培养上清液中IL－6改变[2]:7TD－1细胞配成1×105/mL细胞悬液;每孔100μL加入96孔板;同时加入各组PBMC培养上清液,每孔20μL;再加入PRMI－1640培养基80μL/孔;
37℃,体积分数5％CO2条件下48h;培养结束前4h,每孔加入MTT50μL(5mg/mL);继续培养4h,离心弃上清液;加入盐酸异丙醇(1∶300)120μL/孔,测波长570nm处A值。以各组A值比较PBMC培养上清液中IL－6活性。
（三）统计学处理:用SPSS软件作组间t检验。
二、结果
链球菌抗原刺激的银屑病患者PBMC培养上清液中TNF－α水平下降(与健康对照比较，P＜0.05)、IL－6水平升高(与对照组比较，P＜0.05);而PHA刺激的PBMC培养上清液中各组TNF－α和IL－6水平两组比较差异无显著性。见表1。
三、讨论
参考文献
［1］张理涛，陈学荣，殷金珠.β溶血型链球菌诱发点滴型银屑病发病机制的研究.中华皮肤科杂志，1999，32:99－100.
［2］钱玉昆,殷金珠.实用免疫学新技术.第1版.北京:北京医科大学、中国协和医科大学联合出版社,1994.53－55.
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