用[1]。众多学者在对 AK auto Ab 的研究中证实,其参与了机体和皮肤的多种生理和病理过程,对于维持表皮的自身稳定具有重要意义[2]。为了直接观察 AK auto Ab 对皮肤病理状态的影响,明确其在体内的作用,并使 AK auto Ab 的应用向临床过渡,我们对照观察了人 AK auto Ab 对家兔刺激性接触性皮炎的影响。
一、材料和方法
(一)试剂准备:按李承新等[3]的方法制备 AK auto Ab ,并应用盐析法从亲和纯化 AK auto Ab 后的混合正常人血清中提取丙种球蛋白。
(二)动物处理:取36只成年雄性新西兰白兔(体重1.5~2.5kg;本校实验动物中心提供),按文献[4]用硫化钠溶液诱发刺激性接触性皮炎。随机将动物分为3组,每组12只,分别对应于 AK auto Ab 组、去除 AK auto Ab 的丙种球蛋白对照组(以下简称丙种球蛋白组)及空白对照组。肌内注射给药, AK auto Ab 组和丙种球蛋白组剂量为5mg/kg,空白对照组给予生理盐水注射。每天给药1次,连续给药12d。硫化钠作用前24h取家兔正常皮肤标本及耳静脉血,作用后8h、第3、7、12天取皮损及对侧正常皮肤标本和耳静脉血。采用盲法,具体操作者不知实验分组情况。
(三)皮肤反应强度分级标准:参照有关文献制定皮肤反应强度分级标准[5,6]。红斑:无反应为0,散在红点为0.5,非连续红斑为1.0,连续红斑为2.0,中度红斑为3.0,重度红斑为4.0。肿胀:无反应为0,轻度水肿为2.0,中度水肿为3.0,重度水肿为4.0。糜烂:无反应为0,轻度糜烂为4.0,中度糜烂为5.0,重度糜烂或溃疡为6.0。由3位未参与实验者进行评分,取其平均值。
(四)HE染色及有核细胞计数:冰冻切片,HE染色。高倍镜下每个标本在真皮浅层随机选5个视野,对真皮附属器以外的有核细胞计数,以进行有核细胞密度定量检测[7]。每张切片均由3人观察及评分,取其平均值。
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