(五)酶联免疫吸附试验:以本室制备人角蛋白为抗原,2%BSA37℃2h,倍比稀释血清4℃过夜,羊抗人IgG-HRP(华美公司)37℃1h,OPD显色,酶标检测仪测492nm吸光值[3]。
(六)S Ab C染色[7]:冰冻切片,冷丙酮固定30min,0.3%H2O2甲醇溶液室温20min,2%BSA37℃1h,1∶4000生物素标兔抗人IgG抗体(Pierce公司)4℃过夜,S Ab C复合物(博士德公司)37℃30min,D Ab 显色。
二、结果
(一)大体观察:饱和硫化钠溶液作用于家兔皮肤立刻引起局部红斑、肿胀及少许糜烂,各组间反应较均匀一致;炎症于1~2d内达到高峰,之后炎症反应减弱,修复增强。各组皮肤反应强度分级及统计结果见表1。第1、3天各组间差异无显著性,第5天 AK auto Ab 组与空白对照组比较差异有显著性,第7~12天 AK auto Ab 组与两个对照组比较差异均有显著性。提示 AK auto Ab 组炎症消退速度明显快于两对照组,皮肤损伤修复快、愈合好。两对照组比较差异无显著性(统计结果未显示)。
(二)HE染色:硫化钠作用后8h,皮损表皮可见严重的细胞内水肿,细胞间水肿较轻;真皮水肿、毛细血管扩张,大量的炎症细胞浸润。炎症反应在3d以后开始减弱。以真皮浅层有核细胞记数来评价皮肤炎症反应强度。各组细胞数及统计结果见表2。第1、3天各组间差异无显著性,第7、12天 AK auto Ab 组与两对照组出现显著性差异。提示 AK auto Ab 组炎症反应消退速度明显快于两对照组。两对照组比较差异无显著性(统计结果未显示)。此外,丙种球蛋白组与空白对照组皮损表皮角质形成细胞增生,真皮成纤维细胞、胶原增生明显强于 AK auto Ab 组。
(三)ELISA: AK auto Ab 组动物血清中可检测到人 AK auto Ab 存在,滴度为1∶32~1∶64。丙种球蛋白组及空白对照组动物血清中未检测到人 AK auto Ab 。
表1抗角蛋白自身抗体对家兔刺激性接触性皮炎皮肤反应强度的影响(
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