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玻璃珠-盐析法提取常见致病真菌DNA的研究

  来源:120online      日期:2007-05-07
中华皮肤科杂志2000年第5期第33卷论著作者:秦振宇 吴绍熙 RoyL.Hopfer 吕桂霞 姚聪君 郭宁如单位:吴绍熙(210042南京,中国医学科学院 中国协和医科大学皮肤病研究所指导者);吕桂霞 秦振宇 郭宁如(210042南京,中国医学科学院 中国协和医科大学皮肤病研究所);RoyL.Hopfer(UNCHospitals,UniversityofNorthCarolina)关键词:真菌;致病性;DNA;提取...

  六、PCR

  参照文献[3]

  七、提取DNA浓度检测

  提取的DNA在质量分数为0.8%琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色,中波紫外线观察、照相,并与DNA标准物比较。采用1D软件(SELEquipmentCo.Ltd)获得电泳条带的绝对A值,再以SAS统计软件(6.02)行线性回归分析,绘出标准曲线,并据此推算出提取DNA的含量。

  八、统计学方法

  两种DNA提取方法各重复3次,两组数据做Wilcoxon秩和检验。

  结果

  一、提取的DNA含量

  酚氯仿抽提法和盐析法所得的DNA在质量分数为0.8%琼脂糖凝胶电泳上均为清晰完整的条带(见图1)。所得的DNA含量见表1。对两组数据作Wilcoxon秩和检验,P=0.0239,<0.05,表明这两种方法提取的DNA含量差异有显著性。

  二、PCR结果

  两组DNA提取方法均产生310bp特异性条带。

  表1玻璃珠-盐析法和酶解-酚氯仿抽提法提取DNA浓度比较(±s)μg/mL

  志谢西安医科大学计算机中心陈康高级工程师协助图像分析

  卫生部临床医学重点课题

  参考文献

  [1]Yamakami Y, et al. Evaluation of PCR for detection of DNA specific for Aspergillus species in sera of patients with various forms of pulmonary aspergillosis. J Clin Microbiol, 1998,36:3619- 3623.

  [2]Okhravi N, Adamson P, Mant R, et al. Polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism mediated detection and specification of Candida spp. causing intraocular infection. Invest Ophthalmol Vis Sci, 1998,39:859- 866.

  [3]Muller FC, Werner KE, Kasai M, et al. Rapid extraction of genomic DNA from medically important yeasts and filamentous fungi by high- speed cell disruption. J Clin Microbiol, 1998, 36:1625- 1629.

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