1：标准分子量2：白念珠菌全菌蛋白3：经硫酸铵沉淀后的菌体蛋白4：经DEAE－SephadexA－50凝胶柱(pH7.8)层析后的菌体蛋白5：经DEAE－SephadexA－50凝胶柱(pH8.4)层析后的菌体蛋白6：经ConA－Sepharose－4B凝胶柱层析后纯化的烯醇化酶
1白念珠菌烯醇酶纯化过程
SDS－PAGE图
表1白念珠菌烯醇化酶的纯化
1.白念珠菌培养：实验用白念珠菌系真菌室保存的菌株。以液体沙堡培养基振荡培养24h得酵母悬液。
2.白念珠菌浓度计算：按比浊方法控制菌悬液浓度，最终浓度为1.5×109/mL，浊度相当于麦氏比浊管第1号管。
3.白念珠菌孢子的破壁：采用Lyticase酶解破壁法[1]。
4.白念珠菌可溶蛋白的硫酸胺沉淀分级盐析：以50％及75％的硫酸胺逐次沉淀蛋白液，离心后收集50％及75％硫酸胺溶液沉淀物，将其置于蒸馏水中过夜透析。
5.层析法：以浓度为10mmol/L，pH为7.8的Tris－HCl溶液平衡DEAE－SephadexA－50柱，将所得到的蛋白液过柱，流速为60mL/h，待流出穿过峰后以0.2mol/LNaCl洗柱，接含相对分子质量为47000蛋白的洗脱峰，用蒸馏水透析脱盐。以浓度为10mmol/L，pH8.0的Tris－HCl溶液平衡DEAE－SephadexA－50柱，将上步的洗脱峰过柱，流速为20mL/h，其余步骤同上。以浓度为10mmol/L,pH为7.4的Tris－HCl溶液平衡ConA－Sephrose－4B柱，以上步洗脱峰过柱，流速为15mL/h，接穿过峰。
