2 结果
原代培养的滑膜细胞，PBS冲洗去除未贴壁的细胞，生长至85%汇满时，经流式细胞仪检测CD3阳性细胞为7.85%；CD14阳性细胞为7.30%；CD20阳性细胞为7.50%；von Willebrand factor阳性细胞为0.85%；CD11b阳性细胞为7.80%。当传代至第三代时，以上各种细胞表面标记阳性细胞均小于1%。所以，原代培养的滑膜细胞当传代至第三代时，即可以认为型别较为均一的成纤维样滑膜细胞，这与国外文献［4］报道相一致。
蛋白质进行SDS-PAGE单相电泳后进行Western blots检测，结果显示，RA成纤维样滑膜细胞蛋白质酪氨酸磷酸化程度明显高于OA，其中170 000、150 000、110 000、95 000、85 000、70 000、66 000、54 000等条带差异最为显著。RA FLS灰度扫描值为(1 074 346±8 921)；OA平均灰度扫描值为(290 790±2 760)；RA FLS蛋白质酪氨酸磷酸化程度约为OA FLS的4倍(3.8～4.9)。蛋白质进行ICE-PAGE双相电泳进行检测，RA FLS蛋白酪氨酸磷酸化位点较OA FLS明显增多，其中以42 000～95 000间蛋白质酪氨酸磷酸化位点居多，这与单相SDS-PAGE电泳结果相一致。但是被检测出的酪氨酸磷酸化位点较SDS-PAGE明显增多。双相电泳结果进行灰度扫描结果显示，RA FLS灰度扫描值(4 227 672±8 947)；OA FLS的相应值为(663 480±7 962)。二者之间差异有极显著性(P＜0.01)，RA FLS灰度值约为RA FLS的6.5倍。
IL-1β可以在短时间内导致RA FLS蛋白酪氨酸残基磷酸化程度增加，在1～5 min内，110 000、75 000、65 000、54 000蛋白磷酸化逐渐增强，42 000、38 000蛋白于1～5 min磷酸化程度最高以后逐渐减弱。TNF-α也可以在短时间内导致RA FLS蛋白酪氨酸残基磷酸化程度增加。在1～15 min内，110 000、97 000、80 000、75 000、65 000、54 000、38 000蛋白磷酸化逐渐增强，42 000蛋白于5 min磷酸化程度最高，以后逐渐减弱。在genistein作用下，上述各条带密度明显减弱，但不能达到完全抑制。DMSO对于上述条带密度无明显影响。因此我们认为，酪氨酸激酶可能在IL-1β和TNF-α的信号转导中发挥直接或间接作用。
将上述硝酸纤维素膜洗脱后，以非活化形式MAPKs重新杂交显示，各条带密度无明显区别，从而证实各孔上样量的一致性。
