类风湿关节炎(RA)作为自身免疫性疾病至今病因不明，国内外研究表明，人类白细胞抗原(HLA)DR抗原β链第70～74位氨基酸残基的多态性与RA的易感性有密切的关系，凡是在该段位置上的氨基酸序列为QKRAA、QRRAA或RRRAA的个体，都表现出对RA的易感性增高［1，2］。但不同种族，不同地理环境中，HLA-DRB1基因型的构成差异较大［3］。为探讨这些共同表位(shared epitope, SE)与RA易感性及疾病严重性的相关性，我们对武汉籍汉族的RA患者和健康人群的HLA-DR1和HLA-DR4进行基因分析。
1 资料与方法
1.1 研究对象
78例RA患者均符合美国风湿病协会1987年RA分类标准［4］，男性12例，女性66例，年龄(39±10)岁，病程(10±8)年。另选择健康成年人126名作为正常对照组。所有观察对象均为祖籍三代居住武汉地区，无血缘关系的汉族人。两组对象的年龄和性别构成差异无显著性。
1.2 方法
1.2.1 全血DNA的制备：取外周血3 ml，2% EDAT抗凝，常规盐析法提取DNA。
1.2.2 HLA-DR1和HLA-DR4等位基因及其亚型测定：采用PCR-SSP法，按文献［5］略加改进。引物的核苷酸序列、扩增产物长度及其扩增的特异等位基因分别见表1。以β球蛋白基因作为内对照，5′端引物序列为 5′-TATCATGCCTCTTTGCACCA-TTC-3′，3′端引物为5′-AATGCACTGACCTCCCACATTCC-3′，扩增片段长约580 bp。95 ℃预变性5 min，然后按94 ℃变性25 s，64 ℃退火55 s，72 ℃延伸30 s，循环30次，72 ℃再延伸5 min，扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察。
表1 应用PCR-SSP进行HLA-DRB1*01，
*04亚型分析的特异性引物核苷酸序列、产物长度及扩增特异性
1.3 统计学处理
用χ2检验进行率的比较，两组间差异分析采用t检验。
2 结果
2.1 RA患者和正常对照组共同表位的频率：见表2。RA患者中呈SE阳性的有34例，明显高于对照组(43.6%比15.1%，P＜0.01)，其中编码QKRAA共同表位(DRB1*0401)的有4例(5.1%)，编码QRRAA (DRB1*0101、*0102、*0404、*0405、*0408)有30例(38.5%)。
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