邓安梅 仲人前 陈孙孝 施笑梅 孔宪涛
摘 要 目的:利用重组抗原检测自身免疫疾病患者血清中抗SSB自身抗体并探讨其临床意义。方法:应用DNA重组技术构建SSB基因工程菌,并表达SSB融合蛋白。经GST柱层析法纯化后,分别经蛋白质印迹（WBT）法和酶联免疫吸附（ELISA）法检测20份干燥综合征患者、60份系统性红斑狼疮患者和30份正常人血清。结果:经常规试剂盒检测为SSB（+）的24份患者血清，利用重组抗原检测均阳性；经常规试剂盒检测为SSB（-）的56份患者血清，利用重组抗原检测有11份阳性（WBT法4份，ELISA法7份）。结论:利用重组抗原检测抗SSB自身抗体敏感性较高。利用重组抗原对自身抗体进行定性、定量分析有助于对自身免疫疾病的诊断。
关键词：自身抗原，SSB；自身免疫疾病；蛋白质印迹法；酶联免疫吸附法
在自身免疫病的发病机制中，自身抗原和抗体的反应起着重要的作用。在系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征(SS)中，SSB是重要的自身抗原［1］,抗SSB抗体的检测是诊断SLE,SS的重要的实验室检查指标之一。传统上检测抗SSB抗体多用从动物组织中提取的SSB,其制备较为复杂,难以对检测结果进行质量控制,也难以对自身抗原-抗体之间的分子作用作进一步研究［2］。因此,我们尝试用重组抗原检测抗SSB自身抗体,以利于疾病的早期诊断。
1 材料和方法
1.1 材料 人肝λgt11 cDNA 文库（Dr.R.Davis赠送）；pGEX-2T质粒和JM109菌株均为本实验室保存；Taq DNA多聚酶，EcoRⅠ内切酶，BamH Ⅰ内切酶，T4 DNA连接酶均购自Promega公司。常规检查采用德国欧蒙公司的间接免疫荧光试剂盒及国产ENA（可溶性可抽提核抗原）检测试剂盒（恒佳生物技术公司）。
1.2 血清 标准抗SSB阳性血清由美国疾病控制中心（CDC）提供。患者血清来自本院1994年8月至1997年8月收治的住院患者，其中SLE60例、SS 20例。所有患者均符合美国风湿学会制定的诊断标准［3,4］。30份正常对照血清取自献血员。
1.3 SSB的基因克隆与序列测定 以标准抗SSB血清为免疫探针，筛选人肝λgt11 cDNA文库,挑取表达SSB的阳性克隆。对阳性克隆中含有的cDNA片段进行DNA测序鉴定，参考文献［5］的方法进行。
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