1.1.2 动物 BALB/c小鼠,♂,体重18~22 g,由安徽医科大学实验动物中心提供。
1.1.3 主要仪器与设备 Napco-6100 CO2培养箱,美国杜邦公司;FJ-2107型液体闪烁计数仪,西安262厂;XSZ倒置显微镜,重庆光学仪器厂;YJ-1450型医用净化工作台,苏州净化设备公司;TGL-16c台式高速离心机,上海安亭科学仪器厂;GL20A全自动高速冷冻离心机,湖南仪器仪表总厂离心机厂;EL301 strip reader(酶标仪),美国Bio-Tek公司。
1.1.4 试剂与药物 RPMI 1640培养粉:美国Gibco公司产品,完全RPMI1640培养液加25 mmol·L-1 Hepes,1 mmol·L-1丙酮酸钠,2 mmol·L-1谷氨酰胺,50 μmol·L-1二巯基乙醇,1×105 iU*L-1青霉素G,100 mg·L-1链霉素,10%(体积分数)小牛血清,pH为7.4。植物血凝素(phytohemmaglutinin,PHA):美国Serva公司产品。刀豆蛋白A(concanavalin a,ConA):美国Sigma公司产品。四甲基偶氮唑盐(MTT):美国Sigma公司产品,用含5 g·L-1葡萄糖的磷酸缓冲液(0.02 mol·L-1 pH 7.2)配成5 g·L-1使用液,4℃冰箱避光保存。
1.2 方法[4]
1.2.1 人PBL增殖反应[2] 常规制备人PBL悬液,用完全RPMI1640培养液调成1×1010*L-1。于96孔培养板中每孔加入细胞悬液100μl,4 mg·L-1 PHA 100 μl,置0.05 CO2、37℃培养48 h。于每孔加入5 g·L-1的MTT液100 μl,于振荡器上振荡1 min,再放入0.05 CO2、37℃培养箱中继续培养2 h。培养结束后以760×g离心10 min,吸弃上清后每孔加入酸化异丙醇120 μl,于振荡器上振荡30 s,在酶标仪上于570 nm波长处读每孔吸光度(absorbance,A),结果以其A的均值表示。
1.2.2 IL-2的诱生与检测
1.2.2.1 人PBL IL-2的诱生 配制PBL悬液(1×1010*L-1),于24孔培养板每孔加入0.8 ml RPMI 1640完全培养液、0.1 ml PBL悬液和0.1 ml PHA(终浓度为4 mg·L-1),于0.05 CO2培养箱37℃培养48 h,离心(500×g,10 min)收集上清液,放入-20℃冰箱保存待测。
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