中华结核和呼吸感染2000年第6期第23卷论著摘要作者：李伟彦 徐建国 朱四海单位：南京军区总医院麻醉科 南京，210002...
利用大鼠淡水淹溺模型观察肺泡巨噬细胞(AM)中肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因的表达和血浆、支气管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-α的分泌情况以及己酮可可碱(PTXF)对它们的影响。材料与方法 SD大鼠96只，体重(230±20) g，随机分为：对照组(C组)，淹溺组(D组)。切开右隐静脉置24号套管针接微量输液泵，在气管环间穿刺，向气管内缓慢注入自来水8 ml/kg，水温(15±0.1)℃，模拟淡水淹溺；③己酮可可碱组(P组)，淹溺后立即用PTXF(美国sigma公司)20 mg/kg静脉滴注并以6 mg·kg
-1..h
-1维持。于淹溺后1、2、4、6 h每组分别取8只心脏穿刺取血，支气管肺泡灌洗收集BALF，粘附法分离和纯化AM。TNF-α浓度采用
125I放射免疫法(第二军医大学长征医学科学有限公司)测定。AM中TNF-α mRNA表达的检测：采用一步法提取AM的总RNA，并用随机引物逆转录合成cDNA(reverse transcription saystem，promega公司)。将TNF-α
［1］(正义链5′-GGATCATCTTCTCAAAACTCG-3′，反义链5′-TCACAGAGCAATGACTCCAAA-3′)、β-actin
［2］(正义链5′-TAAAGACCTCTATGCCAACAC-3′，反义链5′-TAAAGCCATGC-CAAATGTCTC-3′)两对引物(中科院上海细胞所)加入PCR系统中扩增，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后拍照。胶片经激光光密度扫描仪(Ds-200，Beckman)扫描，得出486碱基处与348碱基处TNF-α/β-actin条带密度的比值。(4)统计学方法：组间均数经方差分析后，用Newman-Keual检验分析。
结果 (1)一般观察：D组2 h时肺表面散在着一些充血水肿区域；6 h时肺体积明显增大，肺表面的充血水肿呈多个紫红色斑块，切面内有少量血性液体流出。P组2 h肺表面有少量颜色稍红的斑点，6 h时这些斑点周围轻度充血水肿，切面未见液体流出。(2)TNF-α浓度的变化。(3)AM中TNF-α mRNA的表达：C组AM的TNF-α mRNA有微量表达，D组TNF-α mRNA的表达显著增加，在2 h左右达到高峰，P组TNF-α mRNA表达则显著低于D组(表1)。
讨论 本组实验中发现，血浆中TNF-α的浓度在淡水淹溺后虽有一度升高，但其实际值远远低于BALF中的浓度，提示肺泡内的TNF-α主要是局部产生的。以β-actin为内参标准法进行RT-PCR半定量地检测AM中TNF-α mRNA的表达显示，淡水淹溺使肺泡上皮细胞、血管内皮细胞和AM遭到破坏，释放出的多种物质刺激了余下的AM，使TNF-α mRNA的表达增加。2 h以后的逐步降低，可能与TNF-α的反馈抑制有关。
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