材料与方法 采用贴块法培养RASMC并鉴定后［1］，应用本研究所建立的低浓度CO和缺氧气体处 理培养 细胞容器，对各组细胞进行相应处理，常氧组放在二氧化碳孵箱内作为对照。分为常氧组(N )，缺氧组(H)及低浓度CO复合缺氧组(CO+H)。 生长特性观察及胞内钙浓度［Ca2+］ 测定：选 择第4代生长良好的RASMC，胰蛋白酶消化后分散成1×104个/cm2，接种于6孔板，随机 分N、 H、CO+H三组培养，每组6板。每日定时各取2孔细胞观察生长情况。取长满层的细胞，Hanks 液冲洗3次，再用乙二胺四乙酸(EDTA)液温育6 min,最后用M199培养基制成细胞 悬液106个/ml，将荧光剂Fura-2/AM(5 mmol/L) 加入，37℃ 45 min。离心弃上清将细胞悬浮于D′Hanks液［内含1 mmol/L乙二醇四乙酸酯( EGTA)］中测定。激发波 长340 nm和380 nm，光栅5 nm；发射波长510 nm，光栅10 nm。自身荧光作对照，分别加入1 %曲拉 通和20 mmol/L EGTA测最大和最小荧光强度。环-磷酸鸟苷(cGMP)含量测定：三组均先 通入21 % O2 15 min，然后H和CO+H组再通入N2或N2+CO，于1、6、15 min 3个时点取样 。取样时先吸取培养液，再马上加 入1 ml冰冷的0.24 mol/L高氯酸，刮取收集细胞，冰浴超声破碎，离心取上清以3 mol/L K OH中 和至pH值6.3左右，离心除去高氯酸钾沉淀，－20℃贮存备测。cGMP测定按药盒说明进行。 结果以均值±标准差表示(
±s)，采用多因素或单因素方差分析，并做方差保 护显著性检验。
表1 低浓度CO对RASMC的钙浓度的影响（nmol/L）
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39700057)
参考文献
1,王关嵩, 杨晓静, 钱桂生, 等. 大鼠血管平滑肌细胞分离培养的探讨. 第三军医大学学 报, 1998，20: 348-350.
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